1.6 免疫因子TNF-α检测实验

    首先将培养瓶中的巨噬细胞RAW264.7细胞800×g离心5 min，弃上清，加新鲜培养基重悬细胞，计数并调整细胞浓度为1×106/mL，之后将细胞接种于24孔培养板内，然后置37 ℃、5%CO2、95%湿度的培养箱内培养。将细胞分以下几组：A组代表从注射液中提取总核酸刺激细胞组;CpG组代表以注射液核酸为模板，PCR扩增得到富含CpG序列的核酸片段刺激细胞组;No-CpG组代表以注射液核酸为模板，PCR扩增得到不含CpG序列的核酸片段刺激细胞组;No-primer组代表扩增时未加引物的PCR体系(为CpG扩增的阴性对照)刺激细胞组;control：未做任何处理空白组。不同细胞组分别加入相同体积的核酸样品，然后将24孔板置于37 ℃、5% CO2、95%湿度的培养箱内培养12 h后，1 000×g离心20 min，取上清进行检测。免疫因子TNF-α检测实验参照小鼠TNF-α ELISA试剂盒说明书进行。提前将小鼠TNF-α ELISA试剂盒从4 ℃冰箱取出以平衡至室温，设置空白孔加标准品和标本通用稀释液以减除显色液的吸光度空白，其余孔中加不同浓度TNF-α标准品以及上清样品 ......