2.2 海马NVU体外培养体系鉴定

    取体外培养的Ne、As、Bm，固定静置封闭，分别加兔抗大鼠NSE、GFAP、PECAM-1，以及小鼠抗大鼠β-tublin 4 ℃避光孵育过夜。分别加对应的FITC标记的山羊抗兔、RP-E标记的山羊抗小鼠37 ℃避光孵育，加DAPI稀释液常温避光孵育，各共培養体系添加50 L的PBS，体视显微镜和高内涵细胞成像分析技术(high content analysis， HCA)鉴定。

    2.3 含药血清制备

    实验大鼠根据性别和体质量随机分为正常组、中药组和阳性药组，阳性药组灌胃临床等效剂量的二甲双胍(0.18 g/kg)+氟西汀(1.8 mg/kg)[6]，中药组灌胃等效剂量3倍的左归降糖解郁方(32.82 g/kg)，正常组灌胃等容量蒸馏水，每日灌胃2次，连续灌胃3 d，末次给药1 h后腹主动脉采血，离心后取上清56 ℃灭活30 min，过0.22 m滤膜后梯度降温并保存在-80 ℃冰箱中备用。

    2.4 分组、造模及干预

    将构建成功的海马NVU体外培养体系随机分为5组 ......