妇科千金胶囊的抗炎作用与其调节NF-κB信号通路的关系(4)
共转染NF-κB RE萤火虫荧光素酶质粒以及pRL-SV40内参海肾荧光素酶粒(比例为50∶1)于RAW 264.7细胞,置于37 ℃培养箱中孵育24 h。给药后将细胞置于37 ℃细胞培养箱中培养1.5 h后,除正常组外,其他各组均加入LPS使其终浓度为100 ng/mL,置于细胞培养箱中再培养6 h[9]。取出细胞,弃去上清,PBS清洗后,用Promega双荧光报告基因检测试剂盒在多功能酶标仪中检测荧光强度。3 结果
3.1 FKE对RAW 264.7细胞活性影响
采用MTT法初步筛查FKE对RAW 264.7细胞的细胞毒性,如图1a所示,用50~800 μg/mL FKE处理后,与对照组相比,细胞活性未被抑制(P>0.05),说明在此浓度范围内,药物无细胞毒性;图1b表明,FKE叠加LPS使用时在100~400 μg/mL剂量下均未出现细胞毒性(P>0.05)。故后续抗炎活性实验可在400 μg/mL浓度下进行。
3.2 FKE对LPS刺激后细胞炎症因子释放的影响 采用ELISA的方法对药物的抗炎活性进行初步检测 ......
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