鼻咽癌组织中LRP蛋白的表达及意义(2)
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1材料与方法
1.1一般资料
2006年1月至2010年6月收集我院初诊、为进行治疗的56例鼻咽癌患者,组织学类型为54例低分化鳞状细胞癌或未分化癌,2例为泡状核细胞癌。其中男性37例,女性19例,患者年龄24～73岁,中位年龄49岁。选择26例“鼻咽粘膜慢性炎症”患者作为对照组。所有标本均经10%福尔马林固定,并在3d内进行石蜡包埋,由有经验的病理医师诊断,临床分期按照1992年福州分期。
1.2主要药品及试剂
鼠抗人LRP单克隆抗体(武汉博士德技术有限公司),DAB显色试剂盒、多聚赖氨酸防脱片剂、抗原修复缓冲液、SP免疫组化通用试剂盒(北京中山生物公司)。
1.3方法
1.3.1LRP蛋白的免疫组化检测标本行常规石蜡包埋,制成4μm厚切片;二甲苯脱蜡、梯度酒精水化,3%H2O2去除内源性过氧化物酶;微波修复抗原;5%羊血清封闭非特异性抗原;加入一抗为小鼠抗人CDK2单克隆抗体,应用浓度分别为1∶50,4℃过夜;加入的二抗为生物素化羊抗鼠,室温30min;加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲合素;DAB反应显色;苏木精对比染色,中性树胶封片。光镜观察阳性信号,阳性反应物为棕黄色颗粒。在400倍镜下每一切片随机选择5个视野,以细胞无棕黄色或与背景一致的浅棕黄色为阴性,细胞中出现明显的棕黄色颗粒为阳性。具体判断标准:(1)按阳性细胞百分率计分:阳性细胞<10%计0分;10%～50%计1分;>50%计2分。(2)按染色强弱记分:淡黄色计0分;黄色计1分;棕黄色计2分。2项合并得0～1分为阴性;2～3分为阳性;4分为强阳性。
1.3.2放疗敏感性的观察56例患者分别在放疗前后行鼻咽部CT检查,评价肿瘤消退情况。根据放疗前CT扫描,设双侧面颈联合野加下颈切线野或双侧耳前野加全颈切线野 ......
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