RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量
[摘要] 目的 建立RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量的方法。方法 采用反相高效液相色谱，色谱柱：Zirchrom C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)，检测波长403 nm；柱温 30 ℃；流速 1 mL/min。结果 羟基红花黄色素A在0.0 408~0.3 264 μg内线性良好，y=644 726.015 4×-2058.071 4，r=0.999 9，回收率为101.73%，RSD为1.65%。结论 采用该方法进行含量测定准确可靠，重现性好，对谷红注射液的质量控制有重要意义。
[关键词] HPLC；谷红注射液；羟基红花黄色素A
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2012)09(c)-0131-02
谷红注射液为中西药复方制剂，为乙酰谷酰胺和红花提取物制成的灭菌水溶液，主要用于治疗脑血管疾病和脑供血不足，脑血栓，脑栓塞及脑出血恢复期，还可以用于治疗冠心病，脉管炎等。该制剂的现行质量标准只是采用高效液相法对乙酰谷酰胺进行了质量控制，对红花提取物未作相关研究。查阅国内文献，发现从红花提取物角度进行研究的文献仅有寥寥数篇。该研究建立了反相高效液相色谱法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A含量的方法，较文献报道的方法方便快捷，缩短了出峰时间，对谷红注射液的质量控制起到一定的指导作用。
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1 仪器与材料
Waters 2695； Sartorius BS210S型电子天平；UV-2490型紫外分光光度计；SK5200HP超声波清洗器。谷红注射液，博安兄弟制药(中国)有限公司生产20 mL/支，批号为20110723，20110724， 20110725；羟基红花黄色素A对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号：111637-200905；甲醇为色谱纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Zirchrom C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长403 nm；柱温 30 ℃；流速 1 mL/min，进样量10 μL。所选择的流动相为甲醇-0.5%磷酸水(40∶60)等度洗脱。理论板数按羟基红花黄色素A峰计，应不低于5500。精密吸取供试品溶液、流动相、对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，由色谱图提示，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，流动相在此峰位无吸收，对羟基红花黄色素A的含量测定无干扰，方法专属性良好。见图1。
, 百拇医药
2.2 对照品溶液的制备
精密称取2.04 mg羟基红花黄色素A对照品置于100 mL的容量瓶中，25%甲醇定容至刻度，浓度为0.020 4 mg/mL，作为对照品，置于4 ℃冰箱备用。
2.3 供试品的制备
精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
A羟基红花黄色素A B流动相
C谷红注射液
图1 谷红注射液及对照品色谱图
2.4 标准曲线的建立
, http://www.100md.com 取对照品溶液2、4、6、8、10、12、14、16 μL进样，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，得回归方程：y=644 726.015 4×-2 058.071 4,r=0.999 9。表明当进样量在0.040 8~0.326 4 μg内，羟基红花黄色素A线性关系良好。其标准曲线见图2。
图2 标准曲线图
2.5 精密度的测定
精密吸取对照品10 μL进样，连续6次。羟基红花黄色素A的RSD分别为0.85%。表明仪器精密度良好。
2.6 重复性的测定
按2.3项下方法制备供试品6份，过0.22 μm的微孔滤膜，取10 μL进样，羟基红花黄色素A的平均含量分别为0.25 mg/mL；RSD分别为1.22%。表明该方法重复性良好。
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2.7 稳定性的考察
按2.3项下配制供试品，在0，2，4，6，8，10 h取10 μL进样测定，羟基红花黄色素A的平均含量分别为0.25 mg/mL；RSD分别为1.55%。表明样品溶液在10 h内稳定性良好。
2.8 加样回收率
精密称量已知含量的样品1 mL置于50 mL容量瓶，加入定量的对照品，甲醇定容至刻度。精密吸取10 μL进样，羟基红花黄色素A的加样回收率分别为104.9%；RSD分别为1.64%。
2.9 样品测定
按2.3项下配制样品，精密吸取10 μL进样。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
, 百拇医药
取适量羟基红花黄色素A，加水制成每1 mL含羟基红花黄色素A 0.5 mg的溶液，在200~800 nm波长内扫描，结果显示，羟基红花黄色素A的403 nm处呈现最大吸收，因此选择403 nm作为检测波长。
3.2 液相条件的选择
《中国药典》(2010年版)第1部中关于红花的质量控制采用的流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)，首先选择该条件进行试验，发现该条件下主峰拖尾，分离度不是很理想，现参考有关羟基红花黄色素A的文献资料[1-5]，确定了该实验所采用的色谱条件，在该条件下，主峰峰型对称，分离度较好。
3.3 测定方法的选择
该本实验采用RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量，该方法简单易操作、准确可靠、重现性好，对控制谷红注射液药材的质量具有指导性作用。
, 百拇医药
[参考文献]
[1] 姜茁松, 王丽娜, 耿玮. HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量[J].中国现代中药, 2011, 13(9): 26-29.
[2] 魏安池, 代红丽, 谷文英. RP-HPLC法测定红花中羟基红花黄色素A的含量[J].河南工业大学学报：自然科学版,2005, 26(4): 48-51.
[3] 赵明波, 邓秀兰, 王亚玲, 等. 高效液相色谱法测定红花中的羟基红花黄色素A[J].色谱, 2003, 21(6):62-64.
[4] 彭红, 付建武, 余日跃. 复方当归注射液中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量测定[J].时珍国医国药，2009, 20(12):19-21.
[5] 李莉. 高效液相色谱法测定红药片中羟基红花黄色素A的含量[J]. 海峡药学, 2009, 2l(7): 109-110.
(收稿日期：2012-08-07), 百拇医药(孙艳 张群)
[关键词] HPLC；谷红注射液；羟基红花黄色素A
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2012)09(c)-0131-02
谷红注射液为中西药复方制剂，为乙酰谷酰胺和红花提取物制成的灭菌水溶液，主要用于治疗脑血管疾病和脑供血不足，脑血栓，脑栓塞及脑出血恢复期，还可以用于治疗冠心病，脉管炎等。该制剂的现行质量标准只是采用高效液相法对乙酰谷酰胺进行了质量控制，对红花提取物未作相关研究。查阅国内文献，发现从红花提取物角度进行研究的文献仅有寥寥数篇。该研究建立了反相高效液相色谱法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A含量的方法，较文献报道的方法方便快捷，缩短了出峰时间，对谷红注射液的质量控制起到一定的指导作用。
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1 仪器与材料
Waters 2695； Sartorius BS210S型电子天平；UV-2490型紫外分光光度计；SK5200HP超声波清洗器。谷红注射液，博安兄弟制药(中国)有限公司生产20 mL/支，批号为20110723，20110724， 20110725；羟基红花黄色素A对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号：111637-200905；甲醇为色谱纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Zirchrom C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长403 nm；柱温 30 ℃；流速 1 mL/min，进样量10 μL。所选择的流动相为甲醇-0.5%磷酸水(40∶60)等度洗脱。理论板数按羟基红花黄色素A峰计，应不低于5500。精密吸取供试品溶液、流动相、对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，由色谱图提示，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，流动相在此峰位无吸收，对羟基红花黄色素A的含量测定无干扰，方法专属性良好。见图1。
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2.2 对照品溶液的制备
精密称取2.04 mg羟基红花黄色素A对照品置于100 mL的容量瓶中，25%甲醇定容至刻度，浓度为0.020 4 mg/mL，作为对照品，置于4 ℃冰箱备用。
2.3 供试品的制备
精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
A羟基红花黄色素A B流动相
C谷红注射液
图1 谷红注射液及对照品色谱图
2.4 标准曲线的建立
, http://www.100md.com 取对照品溶液2、4、6、8、10、12、14、16 μL进样，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，得回归方程：y=644 726.015 4×-2 058.071 4,r=0.999 9。表明当进样量在0.040 8~0.326 4 μg内，羟基红花黄色素A线性关系良好。其标准曲线见图2。
图2 标准曲线图
2.5 精密度的测定
精密吸取对照品10 μL进样，连续6次。羟基红花黄色素A的RSD分别为0.85%。表明仪器精密度良好。
2.6 重复性的测定
按2.3项下方法制备供试品6份，过0.22 μm的微孔滤膜，取10 μL进样，羟基红花黄色素A的平均含量分别为0.25 mg/mL；RSD分别为1.22%。表明该方法重复性良好。
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2.7 稳定性的考察
按2.3项下配制供试品，在0，2，4，6，8，10 h取10 μL进样测定，羟基红花黄色素A的平均含量分别为0.25 mg/mL；RSD分别为1.55%。表明样品溶液在10 h内稳定性良好。
2.8 加样回收率
精密称量已知含量的样品1 mL置于50 mL容量瓶，加入定量的对照品，甲醇定容至刻度。精密吸取10 μL进样，羟基红花黄色素A的加样回收率分别为104.9%；RSD分别为1.64%。
2.9 样品测定
按2.3项下配制样品，精密吸取10 μL进样。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
, 百拇医药
取适量羟基红花黄色素A，加水制成每1 mL含羟基红花黄色素A 0.5 mg的溶液，在200~800 nm波长内扫描，结果显示，羟基红花黄色素A的403 nm处呈现最大吸收，因此选择403 nm作为检测波长。
3.2 液相条件的选择
《中国药典》(2010年版)第1部中关于红花的质量控制采用的流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)，首先选择该条件进行试验，发现该条件下主峰拖尾，分离度不是很理想，现参考有关羟基红花黄色素A的文献资料[1-5]，确定了该实验所采用的色谱条件，在该条件下，主峰峰型对称，分离度较好。
3.3 测定方法的选择
该本实验采用RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量，该方法简单易操作、准确可靠、重现性好，对控制谷红注射液药材的质量具有指导性作用。
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[参考文献]
[1] 姜茁松, 王丽娜, 耿玮. HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量[J].中国现代中药, 2011, 13(9): 26-29.
[2] 魏安池, 代红丽, 谷文英. RP-HPLC法测定红花中羟基红花黄色素A的含量[J].河南工业大学学报：自然科学版,2005, 26(4): 48-51.
[3] 赵明波, 邓秀兰, 王亚玲, 等. 高效液相色谱法测定红花中的羟基红花黄色素A[J].色谱, 2003, 21(6):62-64.
[4] 彭红, 付建武, 余日跃. 复方当归注射液中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量测定[J].时珍国医国药，2009, 20(12):19-21.
[5] 李莉. 高效液相色谱法测定红药片中羟基红花黄色素A的含量[J]. 海峡药学, 2009, 2l(7): 109-110.
(收稿日期：2012-08-07), 百拇医药(孙艳 张群)
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