一种诊断用谷氨酸脱氢酶酶学性质研究
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[摘要] 目的 研究一种国产谷氨酸脱氢酶的热稳定性、酸碱耐受性、最适温度、最适pH和动力学参数等性质。方法 以α-酮戊二酸、铵离子及还原型辅酶I(NADH)为底物，在谷氨酸脱氢酶催化作用下，转变为谷氨酸和氧化型辅酶I(NAD)，利用NADH在340 nm处有吸收峰，监测其反应速率(-△A/min)，计算谷氨酸脱氢酶的活力单位，采用Linewaeaver-Burk作图法(双倒数作图法)对谷氨酸脱氢酶的米氏常数进行测定。结果 谷氨酸脱氢酶于50 ℃保温20 min保留活力约为87.5%，而在60 ℃保温20 min后残存活力为54%；最适反应温度为45 ℃；最适反应pH为7.5；在pH为5～10范围内酸碱耐受性较好，25 ℃放置20 h残留活力为90%以上。结论 动力学研究表明该酶与国外知名厂家产品相差不大。
[关键词] 谷氨酸脱氢酶；酸碱稳定性；热稳定性；米氏常数
[中图分类号] R9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)01(c)-0107-02
诊断原料用酶的性质是决定酶法试剂质量的关键，因此对临床诊断用酶的酶学性质进行研究具有重要意义[1]。谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase， GLDH )是生物体代谢途径中一种重要的酶类，谷氨酸脱氢酶可分为NAD依赖型(EC1.4.1.2)、NAD(P)依赖型(EC1.4.1.3)及NADP依赖型(EC 1.4.1.4)。酶法尿素氮试剂用到的谷氨酸脱氢酶是NAD依赖型(EC1.4.1.2)，该种谷氨酸脱氢酶一般不太稳定，只有在硫酸铵溶液中才不容易失活[2-3]。谷氨酸脱氢酶可以用于多种生化诊断试剂的配制，谷氨酸脱氢酶是配制尿素氮试剂盒(速率法)所需两种酶之一，尿素氮的含量反应蛋白的分解代谢和肾脏功能[4] ......
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