MicroRNA—218miR—218在肾透明细胞癌中的表达及临床意义(2)
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1 资料与方法
1.1 标本收集
收集河南科技大学第一附属医院的46例肾细胞癌癌组织及30例癌旁≥3.0 cm正常肾组织作为对照组。所有组织标本均经病理学诊断确认为肾细胞癌。其中肾细胞癌中，低分化11例，中分化17例，高分化18例，根据TNM分期，临床Ⅰ期21例， 临床Ⅱ期13例，临床Ⅲ期8例 临床Ⅳ期4例 ，有淋巴结转移的14例，无淋巴结转移的32例，患者年龄28～80岁，平均年龄53.6岁 ，其中男性31例，女性15例。
1.2 RNA提取和 qRT-PCR
选用美国Invotrogen公司的RNA提取试剂盒，抽提组织总RNA。用紫外分光光度计于 260 和280 nm 波长处测定 RNA 提取液的吸光度(D)值，检测 RNA 纯度和浓度。用Invitrogen公司NCode miRNA First-Strand cDNA Synthesis 和 qRT-PCR Kits进行加PolyA尾巴和反转录。操作程序为将消化后RNA 10 μL 、5×反转录缓冲液 4 μL、25 mmol/LMnCl2 2 μL、2 mmol/L ATP 1 μL、Poly A Polymerase 0.4μL、用DEPC 处理后的无酶水补至 20 μL，放置37 ℃15 min， 再取加Poly A后RNA 8 μL、Annealing Buffer 1 μL、 Universal RT Primer(25uM)3 μL ......
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