YAP和CREB蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义(1)
[摘要] 目的 探讨YAP及CREB蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达情况及其意义。方法 采用免疫组化检测2008年1月—2013年12月收治的93例患者，观察20例正常卵巢组织、20例良性卵巢肿瘤及53例上皮性卵巢癌组织中YAP、CREB蛋白的表达情况。结果 YAP在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率为90.57%，而在正常卵巢组织及卵巢良性上皮性肿瘤仅为50%、65%。CREB蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达情况(77.36%)也高于正常卵巢组织(5%)，两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YAP、CREB蛋白可能与上皮性卵巢癌的发生发展密切相关，YAP、CREB在上皮性卵巢癌中的异常表达可为上皮性卵巢癌的诊断、治疗提供实验依据。
[关键词] 卵巢癌；上皮性肿瘤；YAP；CREB；免疫组化
[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)12(b)-0033-03
, 百拇医药
卵巢癌是常见的妇科生殖器官恶性肿瘤之一，因其部位较深，早期病变不易发现，晚期病例也缺乏有效的治疗手段，5年生存率仅为15%～30%[1]，故而严重的威胁着妇女的健康及生命，该实验对该院2008年1月—2013年12月病理科存档的蜡块93例进行研究，探讨YAP和CREB蛋白在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及卵巢上皮性癌中的表达情况，分析其表达的差异性及卵巢上皮性癌临床病理因素间的关系以及两者间的相关性，探讨其在卵巢上皮性恶性肿瘤发生中的作用机制以及它们之间的相关关系，从而有助于为卵巢上皮性恶性肿瘤的早期诊断提供新的分子生物学标志物，同时为临床治疗途径提供一些思路，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料
选择西安交通大学第二附属医院病理科存档的蜡块93例，其中20例为正常卵巢组织，20例良性上皮性卵巢肿瘤，53例卵巢上皮性癌，其中卵巢上皮性癌患者年龄37～68岁，中位数为56岁，采用免疫组化(SP)法检测YAP和CREB蛋白的表达情况，统计学分析其表达的差异性及与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理因素的关系，同时探讨其二者间的相关性。所有患者术前均未接受放、化学或免疫治疗，所有标本均经该院病理科确诊。
, http://www.100md.com
1.2 标本的处理
组织标本均用磷酸缓冲液配置的10%中性甲醛固定液及时固定后，进行乙醇梯度脱水，二甲苯透明以及石蜡包埋，4 μm厚连续切片。
1.3 免疫组织化学实验
(1)兔抗人YAP多克隆均抗体购自美国CST公司，兔抗人CREB多克隆均抗体购自美国CST公司，PBS(0.001M，PH7.4)购自福州迈新生物技术开发有限公司，SP超敏试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司，按试剂盒说明书步骤进行染色，每次试验均设阴性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，以公司提供的阳性片染色作为阳性对照。(2)实验结果判断：①根据阳性细胞所占百分比评分，阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；②染色强度计分以细胞显色反应程度计分：无着色0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；③将阳性细胞所占的百分比分值和染色强度分值相乘为结果：0分为阴性(-)， l～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。以购买的阳性片免疫组化染色结果为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，采用双盲法由两位病理科医生阅片，取其平均值为最终结果。
, 百拇医药
1.4 统计方法
采用SPSS18.0统计软件进行数据分析。χ2检验用于计数资料的比较分析，YAP和CREB的相关分析用Spearman等级分析法。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 YAP、CREB在不同卵巢组织中的表达
在实验中，YAP在正常卵巢组织阳性表达率为50%，YAP在良性上皮卵巢肿瘤的阳性表达率为65%，在恶性上皮性卵巢肿瘤中阳性表达率为90.57%，CREB在正常卵巢组织阳性表达率为5%，在良性上皮卵巢肿瘤的阳性表达率为25%，在恶性上皮性卵巢肿瘤中阳性表达率为77.36%，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
表1 YAP、CREB在三种组织中的表达[n(%)]
, 百拇医药
2.2 YAP、CREB表达与卵巢上皮性癌临床病理学参数关系
YAP的阳性表达在正常卵巢组织与良性卵巢上皮性肿瘤之间的差异无统计学意义，P>0.05，YAP在组织学中低分化(G3)组中的阳性表达(97.1%)与高中分化(GI-G2)组的表达(77.8%)差异有统计学意义，P<0.05(χ2=5.217，P=0.040)；但YAP在上皮性卵巢癌阳性表达与患者年龄、临床分期及淋巴转移差异无统计学意义(P>0.05)。在正常卵巢组织与良性卵巢上皮性肿瘤之间CREB的阳性表达，差异无统计学意义(P>0.05)。CREB在组织学中低分化(G3)组中的阳性表达(85.7%)与高中分化(GI-G2)组的表达(61.1%)差异有统计学意义，P<0.05(χ2=9.382，P=0.001)；CREB在上皮性卵巢癌淋巴转移中阳性率(77.4%)较I-Ⅱ期(69.2%)有升高趋势，均差异有统计学意义，P<0.05(χ2=5.568，P=0.015)。另外，CREB的阳性表达与患者年龄、临床分期差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 YAP和CREB二者表达的相关性分析
该研究显示在正常在卵巢上皮细胞中，YAP和CREB阳性表达率分别为50%和50%，在卵巢上皮性癌组织中YAP和CREB阳性表达率分别为90.75%和77.36，经Spearman秩相关分析发现，卵巢上皮性癌组织中的YAP和CREB表达呈显著的正相关(r=0.442，P=0.001<0.05)，差异有统计学意义。见表2。, 百拇医药(王君 曲群)
[关键词] 卵巢癌；上皮性肿瘤；YAP；CREB；免疫组化
[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)12(b)-0033-03
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卵巢癌是常见的妇科生殖器官恶性肿瘤之一，因其部位较深，早期病变不易发现，晚期病例也缺乏有效的治疗手段，5年生存率仅为15%～30%[1]，故而严重的威胁着妇女的健康及生命，该实验对该院2008年1月—2013年12月病理科存档的蜡块93例进行研究，探讨YAP和CREB蛋白在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及卵巢上皮性癌中的表达情况，分析其表达的差异性及卵巢上皮性癌临床病理因素间的关系以及两者间的相关性，探讨其在卵巢上皮性恶性肿瘤发生中的作用机制以及它们之间的相关关系，从而有助于为卵巢上皮性恶性肿瘤的早期诊断提供新的分子生物学标志物，同时为临床治疗途径提供一些思路，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料
选择西安交通大学第二附属医院病理科存档的蜡块93例，其中20例为正常卵巢组织，20例良性上皮性卵巢肿瘤，53例卵巢上皮性癌，其中卵巢上皮性癌患者年龄37～68岁，中位数为56岁，采用免疫组化(SP)法检测YAP和CREB蛋白的表达情况，统计学分析其表达的差异性及与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理因素的关系，同时探讨其二者间的相关性。所有患者术前均未接受放、化学或免疫治疗，所有标本均经该院病理科确诊。
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1.2 标本的处理
组织标本均用磷酸缓冲液配置的10%中性甲醛固定液及时固定后，进行乙醇梯度脱水，二甲苯透明以及石蜡包埋，4 μm厚连续切片。
1.3 免疫组织化学实验
(1)兔抗人YAP多克隆均抗体购自美国CST公司，兔抗人CREB多克隆均抗体购自美国CST公司，PBS(0.001M，PH7.4)购自福州迈新生物技术开发有限公司，SP超敏试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司，按试剂盒说明书步骤进行染色，每次试验均设阴性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，以公司提供的阳性片染色作为阳性对照。(2)实验结果判断：①根据阳性细胞所占百分比评分，阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；②染色强度计分以细胞显色反应程度计分：无着色0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；③将阳性细胞所占的百分比分值和染色强度分值相乘为结果：0分为阴性(-)， l～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。以购买的阳性片免疫组化染色结果为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，采用双盲法由两位病理科医生阅片，取其平均值为最终结果。
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1.4 统计方法
采用SPSS18.0统计软件进行数据分析。χ2检验用于计数资料的比较分析，YAP和CREB的相关分析用Spearman等级分析法。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 YAP、CREB在不同卵巢组织中的表达
在实验中，YAP在正常卵巢组织阳性表达率为50%，YAP在良性上皮卵巢肿瘤的阳性表达率为65%，在恶性上皮性卵巢肿瘤中阳性表达率为90.57%，CREB在正常卵巢组织阳性表达率为5%，在良性上皮卵巢肿瘤的阳性表达率为25%，在恶性上皮性卵巢肿瘤中阳性表达率为77.36%，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
表1 YAP、CREB在三种组织中的表达[n(%)]
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2.2 YAP、CREB表达与卵巢上皮性癌临床病理学参数关系
YAP的阳性表达在正常卵巢组织与良性卵巢上皮性肿瘤之间的差异无统计学意义，P>0.05，YAP在组织学中低分化(G3)组中的阳性表达(97.1%)与高中分化(GI-G2)组的表达(77.8%)差异有统计学意义，P<0.05(χ2=5.217，P=0.040)；但YAP在上皮性卵巢癌阳性表达与患者年龄、临床分期及淋巴转移差异无统计学意义(P>0.05)。在正常卵巢组织与良性卵巢上皮性肿瘤之间CREB的阳性表达，差异无统计学意义(P>0.05)。CREB在组织学中低分化(G3)组中的阳性表达(85.7%)与高中分化(GI-G2)组的表达(61.1%)差异有统计学意义，P<0.05(χ2=9.382，P=0.001)；CREB在上皮性卵巢癌淋巴转移中阳性率(77.4%)较I-Ⅱ期(69.2%)有升高趋势，均差异有统计学意义，P<0.05(χ2=5.568，P=0.015)。另外，CREB的阳性表达与患者年龄、临床分期差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 YAP和CREB二者表达的相关性分析
该研究显示在正常在卵巢上皮细胞中，YAP和CREB阳性表达率分别为50%和50%，在卵巢上皮性癌组织中YAP和CREB阳性表达率分别为90.75%和77.36，经Spearman秩相关分析发现，卵巢上皮性癌组织中的YAP和CREB表达呈显著的正相关(r=0.442，P=0.001<0.05)，差异有统计学意义。见表2。, 百拇医药(王君 曲群)
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