隐丹参酮抑制人胃癌SGC—7901细胞增殖的实验研究(2)
2 结果
2.1 不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞存活率的影响
采用MTT比色法检测不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞存活率的影响，结果如表1所示。
结果显示，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞刺激6 h和12 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用并不明显，抑制率均低于35%；刺激24 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用较明显，抑制率介于33%～72%之间；刺激48 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用明显，但最低浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率已超过50%。故选取24 h作为隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞抑制作用的最佳时间。
刺激24 h后，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用与药物浓度之间呈线性关系(y=0.498x+ 20.56，R2= 0.972)，并由此计算出隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的半抑制浓度(IC50)为59.11 μM，如图1所示；与空白对照组相比，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞均有抑制作用(P<0.01)；各隐丹参酮组间两两比较结果为：隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率，在20 μM与40 μM组之间和40 μM与60 μM组之间差异无统计学意义(P分别为0.162和0.110)，其余各组间差异有统计学意义(P<0.05)。
, 百拇医药
图1 不同浓度隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制增殖曲线
2.2 不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞形态的影响
在倒置显微镜下，人胃癌SGC-7901细胞形态如下：空白对照组的SGC-7901细胞呈现梭形，大小均一，细胞壁光滑，折光性好。不同浓度隐丹参酮作用SGC-7901细胞24 h后出现的变化：药物浓度低时，核染色质固缩、聚集在核膜周边；随着药物浓度加大，大部分细胞的细胞膜出现皱缩、内陷和芽状突起。48 h 后出现的变化：药物浓度低时，核染色质固缩、聚集在核膜周边；药物浓度适中时，大部分细胞出现凋亡，胞浆浓缩、胞膜起泡，出芽，细胞体积逐渐变小，出现凋亡小体；药物浓度高时，细胞出现坏死现象，细胞膜破裂，内容物释放。
3 讨论
目前，从丹参中已提取近50种丹参酮及其衍生物[5]，隐丹参酮是众多丹参酮中的一种，具有改善微循环、清除氧自由基、抗感染等药理作用，近年来它的抗肿瘤活性陆续被报道[6]。
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研究发现隐丹参酮对前列腺癌、胆管癌、黑色素瘤等多种人类肿瘤细胞具有不良反应，引起了广泛关注[7-9]，但有关隐丹参酮对胃癌的影响少见报道。
该研究通过MTT法检测不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响，结果显示：①刺激6 h和12 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均<35%；刺激24 h后，随着隐丹参酮浓度的递增，其对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率从33%逐渐增加至72%；刺激48 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均>50%。表明隐丹参酮具有抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖的作用，抑制作用的最佳时间为24 h。②刺激24 h后，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的IC50为59.11 μM，明显低于陈春雷等[10]报道的隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞作用24 h的IC50(93.77μM)，表明隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用更为显著。③与空白对照组相比，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞均有抑制作用(P<0.01)，且除了20 μM与40 μM组及40 μM与60 μM组之间无差异无统计学意义(P分别为0.162和0.110)之外，其余各组间差异有统计学意义(P<0.05)，表明隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用呈现一定的浓度依赖性。
, 百拇医药
不同浓度隐丹参酮作用人胃癌SGC-7901细胞，细胞呈现不同的形态特征，浓度很低时，胞质均匀，DNA逐渐变成不规则状，核质固缩聚集，有出泡现象。随着浓度增加，细胞出现明显的核固缩，染色质片段化和边缘化，形成凋亡小体；最后细胞呈坏死状，细胞变圆，裂解，漂浮于培养液中。实验结果表明，隐丹参酮能够诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡，且细胞凋亡在一定范围内跟药物浓度呈依赖性关系。
今后，该研究将从细胞、分子及基因水平探索隐丹参酮抗肿瘤作用机理，以期进一步丰富隐丹参酮抗肿瘤作用的基础研究、拓宽隐丹参酮的应用范围，为其在肿瘤治疗领域的临床应用积累试验和理论依据。
[参考文献]
[1] Park ES， Do IG， Park CK， et al. Cyclooxygenase-2 Is an Independent Prognostic Factor in Gastric Carcinoma Patients Receiving Adjuvant Chemotherapy and Is Not Associated with EBV Infection [J] .Clin Cancer Res，2009， 15 (1) ： 291-298.
[2] Forn M， Fernndez- Banares F， Gonzlez- Mnguez C， et al. Lack of clinical usefulness of Das-1 monoclonal antibody and mucin expression as risk markers of gastric carcinoma in patients with gastric intestinalmetaplasia[J].Am J Clin Pathol，2009，131(1)：99-105., 百拇医药(邓凤春 杨钰 赵红晔 王滨 周丽 沈云虹)
2.1 不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞存活率的影响
采用MTT比色法检测不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞存活率的影响，结果如表1所示。
结果显示，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞刺激6 h和12 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用并不明显，抑制率均低于35%；刺激24 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用较明显，抑制率介于33%～72%之间；刺激48 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用明显，但最低浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率已超过50%。故选取24 h作为隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞抑制作用的最佳时间。
刺激24 h后，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用与药物浓度之间呈线性关系(y=0.498x+ 20.56，R2= 0.972)，并由此计算出隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的半抑制浓度(IC50)为59.11 μM，如图1所示；与空白对照组相比，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞均有抑制作用(P<0.01)；各隐丹参酮组间两两比较结果为：隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率，在20 μM与40 μM组之间和40 μM与60 μM组之间差异无统计学意义(P分别为0.162和0.110)，其余各组间差异有统计学意义(P<0.05)。
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图1 不同浓度隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制增殖曲线
2.2 不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞形态的影响
在倒置显微镜下，人胃癌SGC-7901细胞形态如下：空白对照组的SGC-7901细胞呈现梭形，大小均一，细胞壁光滑，折光性好。不同浓度隐丹参酮作用SGC-7901细胞24 h后出现的变化：药物浓度低时，核染色质固缩、聚集在核膜周边；随着药物浓度加大，大部分细胞的细胞膜出现皱缩、内陷和芽状突起。48 h 后出现的变化：药物浓度低时，核染色质固缩、聚集在核膜周边；药物浓度适中时，大部分细胞出现凋亡，胞浆浓缩、胞膜起泡，出芽，细胞体积逐渐变小，出现凋亡小体；药物浓度高时，细胞出现坏死现象，细胞膜破裂，内容物释放。
3 讨论
目前，从丹参中已提取近50种丹参酮及其衍生物[5]，隐丹参酮是众多丹参酮中的一种，具有改善微循环、清除氧自由基、抗感染等药理作用，近年来它的抗肿瘤活性陆续被报道[6]。
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研究发现隐丹参酮对前列腺癌、胆管癌、黑色素瘤等多种人类肿瘤细胞具有不良反应，引起了广泛关注[7-9]，但有关隐丹参酮对胃癌的影响少见报道。
该研究通过MTT法检测不同浓度的隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响，结果显示：①刺激6 h和12 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均<35%；刺激24 h后，随着隐丹参酮浓度的递增，其对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率从33%逐渐增加至72%；刺激48 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均>50%。表明隐丹参酮具有抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖的作用，抑制作用的最佳时间为24 h。②刺激24 h后，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的IC50为59.11 μM，明显低于陈春雷等[10]报道的隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞作用24 h的IC50(93.77μM)，表明隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用更为显著。③与空白对照组相比，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞均有抑制作用(P<0.01)，且除了20 μM与40 μM组及40 μM与60 μM组之间无差异无统计学意义(P分别为0.162和0.110)之外，其余各组间差异有统计学意义(P<0.05)，表明隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用呈现一定的浓度依赖性。
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不同浓度隐丹参酮作用人胃癌SGC-7901细胞，细胞呈现不同的形态特征，浓度很低时，胞质均匀，DNA逐渐变成不规则状，核质固缩聚集，有出泡现象。随着浓度增加，细胞出现明显的核固缩，染色质片段化和边缘化，形成凋亡小体；最后细胞呈坏死状，细胞变圆，裂解，漂浮于培养液中。实验结果表明，隐丹参酮能够诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡，且细胞凋亡在一定范围内跟药物浓度呈依赖性关系。
今后，该研究将从细胞、分子及基因水平探索隐丹参酮抗肿瘤作用机理，以期进一步丰富隐丹参酮抗肿瘤作用的基础研究、拓宽隐丹参酮的应用范围，为其在肿瘤治疗领域的临床应用积累试验和理论依据。
[参考文献]
[1] Park ES， Do IG， Park CK， et al. Cyclooxygenase-2 Is an Independent Prognostic Factor in Gastric Carcinoma Patients Receiving Adjuvant Chemotherapy and Is Not Associated with EBV Infection [J] .Clin Cancer Res，2009， 15 (1) ： 291-298.
[2] Forn M， Fernndez- Banares F， Gonzlez- Mnguez C， et al. Lack of clinical usefulness of Das-1 monoclonal antibody and mucin expression as risk markers of gastric carcinoma in patients with gastric intestinalmetaplasia[J].Am J Clin Pathol，2009，131(1)：99-105., 百拇医药(邓凤春 杨钰 赵红晔 王滨 周丽 沈云虹)