隐丹参酮抑制人胃癌SGC—7901细胞增殖的实验研究(1)
[摘要] 目的 探讨隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法 通过体外无菌传代培养2013年5月所购的人胃癌SGC-7901细胞，设空白对照组与20 μm、40 μm、60 μm、80 μm和100 μm五个浓度的隐丹参酮组，分别于6 h、12 h、24 h和48 h后采用MTT法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率，并观察药物作用24 h和48 h后细胞的形态变化。 结果 ①刺激6 h和12 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均<35%；刺激24 h后，随着隐丹参酮浓度的递增，其对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率从33%逐渐增加至72%；刺激48 h后，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞的抑制率均>50%。②刺激24 h后，隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的IC50为59.11 μM，③与空白对照组相比，各隐丹参酮组对人胃癌SGC-7901细胞均有抑制作用(P<0.01)，且除了20 μM与40 μM组及40 μM与60 μM组之间差异无统计学意义(P分别为0.162和0.110)，其余各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞的增殖有明显的抑制作用，且有时间和剂量依赖关系；究其原因可能是隐丹参酮能够诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡，具体机制有待进一步研究。
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[关键词] 隐丹参酮；人胃癌SGC-7901细胞；MTT；细胞凋亡
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)12(b)-0049-02
胃癌(Gastric Cancer)是常见的消化道恶性肿瘤，严重危害威胁人类健康[1-3]，因此对胃癌的防治和治疗等研究成为肿瘤研究领域的一大热点课题。传统中药以其价格低廉、毒副作用小的优势，辅助治疗胃癌有很好的前景。隐丹参酮(cryptotanshinone)是从活血化瘀中药丹参中提取出的脂溶性有效成分，具有抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡或分化的作用[4]，但有关隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞作用的研究，国内却鲜有报道。该研究采用MTT法检测隐丹参酮对SGC-7901细胞(2013年5月购自上海生命科学研究院细胞资源中心)增殖的抑制作用，以期进一步丰富隐丹参酮抗肿瘤作用的基础研究、拓宽隐丹参酮的应用范围，为胃癌患者的辅助治疗提供一种新的思路。现报道如下。
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1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 肿瘤细胞 人胃癌SGC-7901细胞于2013年5月购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。
1.1.2 药品及试剂 隐丹参酮购自上海源叶生物科技有限公司(HPLC≥98%)；胎牛血清(FBS) 购自杭州四季青生物工程材料研究所；RPMI 1640培养基及细胞消化液胰酶(Tyrisin)为美国Gibco公司产品；四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)均为美国Sigma公司产品。
1.1.3 主要仪器 细胞培养瓶产自美国Corning公司；细胞培养板及针头滤器(孔径：0.2 um)产自美国Costar公司；MR1812高速冷冻离心机产自法国Jouan公司；101-1AB型电热鼓风干燥箱产自天津市泰新特仪器有限公司；UV-2550 UV-visible speetrophoto meter，SHIMADZU Corporation Assembled in China；倒置显微镜(IMT-2)产自Olympus公司；超净工作台产自苏州安泰空气技术有限公司；5%CO2孵箱产自Thermo Electron Corporation。
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1.2 方法
1.2.1 药液配制 隐丹参酮用DMSO配成一定浓度的储备液，过滤除菌，分装冻存，临用再前用培养液稀释成所需浓度(药物作用于细胞时，DMSO的终浓度小于或等于0.1% (v/v)，该浓度对细胞生长无影响)。
1.2.2 隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞存活率的影响 采用MTT法比色法：取96孔培养板，边缘的孔内加PBS缓冲液填充，中间的孔作为实验观察孔。除调零孔不加细胞悬液外，其它各实验观察孔，调整细胞悬液浓度，取无菌传代培养第3～8代细胞，以1×104/孔的密度接种于孔板内，置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中培养。待细胞稳定生长4 h后，设空白对照组和五个不同浓度的隐丹参酮组(终浓度设梯度为20、40、60、80、100 μM)，每种浓度5个复孔。除空白对照组外，每孔中加入相应浓度的隐丹参酮，分别刺激6 h、12 h、24 h、48 h后，加入0.5%MTT溶液，继续培养4 h；小心吸去培养液；每孔加入150 μl DMSO，置37 ℃、5% CO2 细胞培养箱培养10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570 nm/630 nm测量各孔的吸光值。重复测定3次后，分别计算抑制率。抑制率=(对照组OD值-用药组OD值)/对照组OD值×100%。(注：每组去掉一个OD值最低值和一个最高值，取剩余三个复孔OD值来计算。)
1.2.3 细胞的形态学观察 取对数生长的细胞，以5.0×105/孔的密度接种于6孔细胞培养板，设空白对照组和五个不同浓度的隐丹参酮组。待细胞密度长至70%～80%时，除空白对照组外，每孔中加入相应浓度的隐丹参酮，均于作用24 h和48 h后倒置显微镜下观察各组细胞形态变化。
1.3 统计方法
所得数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 13.0统计分析软件的One-Way ANOVA过程进行方差分析，最小显著差法(Least significant difference，LSD)进行两两比较，双侧检验以P<0.05表示差异有统计学意义。, http://www.100md.com(邓凤春 杨钰 赵红晔 王滨 周丽 沈云虹)
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[关键词] 隐丹参酮；人胃癌SGC-7901细胞；MTT；细胞凋亡
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)12(b)-0049-02
胃癌(Gastric Cancer)是常见的消化道恶性肿瘤，严重危害威胁人类健康[1-3]，因此对胃癌的防治和治疗等研究成为肿瘤研究领域的一大热点课题。传统中药以其价格低廉、毒副作用小的优势，辅助治疗胃癌有很好的前景。隐丹参酮(cryptotanshinone)是从活血化瘀中药丹参中提取出的脂溶性有效成分，具有抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡或分化的作用[4]，但有关隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞作用的研究，国内却鲜有报道。该研究采用MTT法检测隐丹参酮对SGC-7901细胞(2013年5月购自上海生命科学研究院细胞资源中心)增殖的抑制作用，以期进一步丰富隐丹参酮抗肿瘤作用的基础研究、拓宽隐丹参酮的应用范围，为胃癌患者的辅助治疗提供一种新的思路。现报道如下。
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1.1 一般资料
1.1.1 肿瘤细胞 人胃癌SGC-7901细胞于2013年5月购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。
1.1.2 药品及试剂 隐丹参酮购自上海源叶生物科技有限公司(HPLC≥98%)；胎牛血清(FBS) 购自杭州四季青生物工程材料研究所；RPMI 1640培养基及细胞消化液胰酶(Tyrisin)为美国Gibco公司产品；四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)均为美国Sigma公司产品。
1.1.3 主要仪器 细胞培养瓶产自美国Corning公司；细胞培养板及针头滤器(孔径：0.2 um)产自美国Costar公司；MR1812高速冷冻离心机产自法国Jouan公司；101-1AB型电热鼓风干燥箱产自天津市泰新特仪器有限公司；UV-2550 UV-visible speetrophoto meter，SHIMADZU Corporation Assembled in China；倒置显微镜(IMT-2)产自Olympus公司；超净工作台产自苏州安泰空气技术有限公司；5%CO2孵箱产自Thermo Electron Corporation。
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1.2 方法
1.2.1 药液配制 隐丹参酮用DMSO配成一定浓度的储备液，过滤除菌，分装冻存，临用再前用培养液稀释成所需浓度(药物作用于细胞时，DMSO的终浓度小于或等于0.1% (v/v)，该浓度对细胞生长无影响)。
1.2.2 隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞存活率的影响 采用MTT法比色法：取96孔培养板，边缘的孔内加PBS缓冲液填充，中间的孔作为实验观察孔。除调零孔不加细胞悬液外，其它各实验观察孔，调整细胞悬液浓度，取无菌传代培养第3～8代细胞，以1×104/孔的密度接种于孔板内，置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中培养。待细胞稳定生长4 h后，设空白对照组和五个不同浓度的隐丹参酮组(终浓度设梯度为20、40、60、80、100 μM)，每种浓度5个复孔。除空白对照组外，每孔中加入相应浓度的隐丹参酮，分别刺激6 h、12 h、24 h、48 h后，加入0.5%MTT溶液，继续培养4 h；小心吸去培养液；每孔加入150 μl DMSO，置37 ℃、5% CO2 细胞培养箱培养10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570 nm/630 nm测量各孔的吸光值。重复测定3次后，分别计算抑制率。抑制率=(对照组OD值-用药组OD值)/对照组OD值×100%。(注：每组去掉一个OD值最低值和一个最高值，取剩余三个复孔OD值来计算。)
1.2.3 细胞的形态学观察 取对数生长的细胞，以5.0×105/孔的密度接种于6孔细胞培养板，设空白对照组和五个不同浓度的隐丹参酮组。待细胞密度长至70%～80%时，除空白对照组外，每孔中加入相应浓度的隐丹参酮，均于作用24 h和48 h后倒置显微镜下观察各组细胞形态变化。
1.3 统计方法
所得数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS 13.0统计分析软件的One-Way ANOVA过程进行方差分析，最小显著差法(Least significant difference，LSD)进行两两比较，双侧检验以P<0.05表示差异有统计学意义。, http://www.100md.com(邓凤春 杨钰 赵红晔 王滨 周丽 沈云虹)
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