超深低温冷冻与碳化二亚胺交联的同种异体肌腱修复兔跟腱损伤的实验研究(2)
1.2 同种异体肌腱的交联并肝素化肌腱用50 mmol/L MES缓冲液浸泡24 h,与EDC交联液(含50 mmol/L MES,5 mmol/L EDC, 5mmol/L NHS,用40%乙醇配制),室温交联6 h后,95%乙醇漂洗2次,30 min/次,PBS漂洗2次共24 h,Hepes缓冲液漂洗4次,20 min/次。真空冷冻干燥后,环氧乙烷消毒备用。
1.3 免疫原性实验
选取雄性SD大鼠40只,体重为(250±20)g。实验前背部剃毛,常规消毒,按0.35 mL/kg的水合氯醛进行腹腔内注射麻醉动物。实验分两组,每组20只。各组脊背皮下分别埋置上述两组肌腱(1组为EDC交联,2组为未处理组),3~0丝线缝合伤口,定期换药。分别于术后第1、4周以脱颈法个处死老鼠10只,取大鼠皮下埋藏组织活检,HE染色观察移植大鼠皮下后的免疫反应。观察炎性反应分级[1]I级为试样周围未见或仅见少量淋巴细胞;II级为试样周围可见少量淋巴细胞;III级为试样周围可见少量嗜中性粒细胞、淋巴细胞浸润和巨细胞反应;Ⅳ级为试样周围可见以嗜中性粒细胞浸润为主的炎症反应,可见吞噬细胞。
1.4 同种异体肌腱移植
采用成年兔30只,随机分为两组,分别于双侧跟腱止点处切断[2] ......
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