人脑胶质瘤中KAI1/CD82的表达及其临床意义(1)
[摘要] 目的 探讨KAI1/CD82在人脑胶质瘤中的表达及其与恶性程度的关系。方法 收集脑胶质瘤病理132例，为胶质瘤组，对照组为20例颅脑外伤内减压的脑组织，按照胶质瘤级别胶质瘤组分为四个亚组。采用免疫组化方法分析胶质瘤组与对照组间，以及不同恶性程度胶质瘤中KAI1/CD82基因表达。 结果KAI1/CD82在胶质瘤组中表达率显著高于对照组(P<0.05)。不同恶性程度胶质瘤中KAI1/CD82的表达差异有统计学意义(P<0.05)。KAI1/CD82的表达与人脑胶质瘤的恶性程度呈正相关，在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤中表达明显高于Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤(P<0.05)。通过随访发现KAI1/CD82阳性组复发率低于阴性组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KAI1/CD82在胶质瘤的发生和发展中起着重要作用。检测KAI1/CD82的表达可能成为监测胶质瘤进展及临床上判断预后的重要参考指标。
[关键词] 胶质瘤；KAI1/CD82；免疫组化
[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2015)03(b)-0112-02
胶质瘤(glioma)是颅内最常见的原发恶性肿瘤，患者治疗失败和死亡的主要原因是肿瘤的侵袭转移。KAI1/CD82是近年发现的特异性肿瘤转移抑制基因，关于KAI1/CD82抑制肿瘤侵袭转移的作用机制极其复杂，尚未完全阐明。目前国内外，对KAI1/CD82在胶质瘤中的表达及作用研究较少。本实验通过免疫组织化学法对KAI1/CD82在不同恶性程度的胶质瘤组织中的表达进行研究，探讨KAI1/CD82胶质瘤恶性程度与表达水平之间的关系，为进一步治疗和判断预后提供新的参考依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取辽宁省盘锦市中心医院2011年12月—2012年12月收治、手术切除并经病理组织学确诊的胶质瘤132例，为胶质瘤组。132例患者中，男58例，女74例，年龄22～67岁、平均49岁。按2000年WHO胶质瘤分类标准进行分级： I级28例，Ⅱ级50例，Ⅲ级38例，Ⅳ级16例；24例正常脑组织标本均为急性颅脑损伤患者行内减压术切除的脑组织，为对照组。胶质瘤组与对照组患者在年龄、性别、组织部位等一般资料上上无显著差异，具有可比性。所有标本经10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋。
1.2 主要试剂及免疫组化染色
兔抗人KAI1/CD82单克隆抗体及免疫组化SP试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。免疫组化技术采用SP法，标本连续组织切片4～6 μm，常规采用脱蜡，水化，PBS冲洗，3%H2O2室温15 min，PBS冲洗，高压PH9.0抗原修复1 min30 s，加入一抗4℃过夜。PBS冲洗，加入二抗37℃孵育30min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素对比染色，水洗分化，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，观察。用已知阳性组织切片做阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判断
以在胞浆内出现棕黄色颗粒判定为阳性。根据染色程度及染色阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比综合计分。按照阳性细胞比例计分：≤25%为0分，25%～50%为1分，50%～75%为2分，大于75%为3分；不染色记0分，淡黄色记1分，黄色或深黄色记2分，棕黄色记3分。每张切片的两项得分之和<4分为阴性表达，≥4分为阳性表达。
1.4 统计方法
所得数据采用SPSS 17.0软件进行统计，χ2检验及Speaman相关分析，P<0.05为有统计学意义
2 结果
2.1 KAI1/CD82蛋白在正常脑组织和脑胶质瘤中的阳性表达
脑胶质瘤组织中KAI1/CD82在脑胶质瘤中阳性率为63.63%(84/132)，高于对照组29.17%(7/24)；差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.2 不同病理级别脑胶质瘤标本中KAI1/CD82阳性表达情况
KAI1/CD82蛋白阳性表达率分别为：I级42.86%(12/28)，II级56%(28/50)，Ⅲ级78.95%(30/38)，Ⅳ级87.5%(14/16)，将各相邻级别脑胶质瘤KAI1/CD82蛋白阳性表达率进行χ2检验，差异无统计学意义(P>0.05)；将低级别组(I+Ⅱ)与高级别组(Ⅲ+Ⅳ)的Kiss-1阳性表达率进行χ2检验，差异有统计学意义(χ2=6.29，P<0.05)。
KAI1/CD82在I级+ II级与III级+IV级阳性表达率比较，差异有统计学意义(χ2=6.29，P<0.05)。
2.3 脑胶质瘤复发率的比较
通过对脑胶质瘤患者术后1年的随访，我们发现脑胶质瘤总复发率为42.42%(56/132)，KAI1/CD82阳性组复发率为33.33%(28/84)，KAI1/CD82阴性组复发率为62.50%(30/48)，KAI1/CD82阳性组的1年复发率低于阴性组，两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。
3 讨论
KAI1/CD82是位于人染色体11P11.2上高度保守的抑癌基因，最早是由Dong等研究前列腺癌时发现的，它编码含有267个氨基酸的蛋白质CD82，具有10个外显子及9个内含子的，是属于跨膜4超家族成员之一的细胞表面糖蛋白。后来的研究发现KAI1/CD82在乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等多种实体肿瘤中存在不同程度的表达较弱或缺失，它在肿瘤的浸润和转移中起着非常重要的作用。一些研究[1]发现KAI1/CD82在乳腺正常组织高表达，而在乳腺癌中存在表达减弱，并且它与ER阳性呈正相关。肿瘤恶性程度越低，KAI1/CD82表达越高，越不容易发生淋巴结和远处转移[2]，患者5年生存率也越高。后来一些研究者[3]发现KAI1/CD82蛋白在肺良性病组的表达高于肺癌组，与临床分期，病理分化程度和淋巴结转移相关，但与性别，年龄，肿瘤大小和病理类型无关。KAI1/CD82的高表达能抑制肺癌区域淋巴结的转移[4]， Choi UJ 等[5]证实KAI1/CD82的下降通过PI3K/Akt/mTOR信息传导路径对H1299肺癌细胞转移表型下调Rac1的表达。KAI1/CD82在大肠癌中阳性表达约55%，其表达和Dukes'分期，静脉侵犯，淋巴结转移，肿瘤分化程度和肝转移之间有统计上的显著相关。并且KAI1/CD82表达和Dukes分期被确定为重要和独立的预后因素[6]。KAI1/CD82表达的减弱或者缺失可能是肿瘤发生和发展的潜在因素。不少文献报道KAI1/CD82在通过Sprouty2的上调抑制肝癌细胞迁移，野生型p53和JunB的协同作用下，调节着肝癌细胞的KAI1/CD82的蛋白表达[8-9]。, 百拇医药(贾军等)
[关键词] 胶质瘤；KAI1/CD82；免疫组化
[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2015)03(b)-0112-02
胶质瘤(glioma)是颅内最常见的原发恶性肿瘤，患者治疗失败和死亡的主要原因是肿瘤的侵袭转移。KAI1/CD82是近年发现的特异性肿瘤转移抑制基因，关于KAI1/CD82抑制肿瘤侵袭转移的作用机制极其复杂，尚未完全阐明。目前国内外，对KAI1/CD82在胶质瘤中的表达及作用研究较少。本实验通过免疫组织化学法对KAI1/CD82在不同恶性程度的胶质瘤组织中的表达进行研究，探讨KAI1/CD82胶质瘤恶性程度与表达水平之间的关系，为进一步治疗和判断预后提供新的参考依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取辽宁省盘锦市中心医院2011年12月—2012年12月收治、手术切除并经病理组织学确诊的胶质瘤132例，为胶质瘤组。132例患者中，男58例，女74例，年龄22～67岁、平均49岁。按2000年WHO胶质瘤分类标准进行分级： I级28例，Ⅱ级50例，Ⅲ级38例，Ⅳ级16例；24例正常脑组织标本均为急性颅脑损伤患者行内减压术切除的脑组织，为对照组。胶质瘤组与对照组患者在年龄、性别、组织部位等一般资料上上无显著差异，具有可比性。所有标本经10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋。
1.2 主要试剂及免疫组化染色
兔抗人KAI1/CD82单克隆抗体及免疫组化SP试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。免疫组化技术采用SP法，标本连续组织切片4～6 μm，常规采用脱蜡，水化，PBS冲洗，3%H2O2室温15 min，PBS冲洗，高压PH9.0抗原修复1 min30 s，加入一抗4℃过夜。PBS冲洗，加入二抗37℃孵育30min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素对比染色，水洗分化，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，观察。用已知阳性组织切片做阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判断
以在胞浆内出现棕黄色颗粒判定为阳性。根据染色程度及染色阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比综合计分。按照阳性细胞比例计分：≤25%为0分，25%～50%为1分，50%～75%为2分，大于75%为3分；不染色记0分，淡黄色记1分，黄色或深黄色记2分，棕黄色记3分。每张切片的两项得分之和<4分为阴性表达，≥4分为阳性表达。
1.4 统计方法
所得数据采用SPSS 17.0软件进行统计，χ2检验及Speaman相关分析，P<0.05为有统计学意义
2 结果
2.1 KAI1/CD82蛋白在正常脑组织和脑胶质瘤中的阳性表达
脑胶质瘤组织中KAI1/CD82在脑胶质瘤中阳性率为63.63%(84/132)，高于对照组29.17%(7/24)；差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.2 不同病理级别脑胶质瘤标本中KAI1/CD82阳性表达情况
KAI1/CD82蛋白阳性表达率分别为：I级42.86%(12/28)，II级56%(28/50)，Ⅲ级78.95%(30/38)，Ⅳ级87.5%(14/16)，将各相邻级别脑胶质瘤KAI1/CD82蛋白阳性表达率进行χ2检验，差异无统计学意义(P>0.05)；将低级别组(I+Ⅱ)与高级别组(Ⅲ+Ⅳ)的Kiss-1阳性表达率进行χ2检验，差异有统计学意义(χ2=6.29，P<0.05)。
KAI1/CD82在I级+ II级与III级+IV级阳性表达率比较，差异有统计学意义(χ2=6.29，P<0.05)。
2.3 脑胶质瘤复发率的比较
通过对脑胶质瘤患者术后1年的随访，我们发现脑胶质瘤总复发率为42.42%(56/132)，KAI1/CD82阳性组复发率为33.33%(28/84)，KAI1/CD82阴性组复发率为62.50%(30/48)，KAI1/CD82阳性组的1年复发率低于阴性组，两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。
3 讨论
KAI1/CD82是位于人染色体11P11.2上高度保守的抑癌基因，最早是由Dong等研究前列腺癌时发现的，它编码含有267个氨基酸的蛋白质CD82，具有10个外显子及9个内含子的，是属于跨膜4超家族成员之一的细胞表面糖蛋白。后来的研究发现KAI1/CD82在乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等多种实体肿瘤中存在不同程度的表达较弱或缺失，它在肿瘤的浸润和转移中起着非常重要的作用。一些研究[1]发现KAI1/CD82在乳腺正常组织高表达，而在乳腺癌中存在表达减弱，并且它与ER阳性呈正相关。肿瘤恶性程度越低，KAI1/CD82表达越高，越不容易发生淋巴结和远处转移[2]，患者5年生存率也越高。后来一些研究者[3]发现KAI1/CD82蛋白在肺良性病组的表达高于肺癌组，与临床分期，病理分化程度和淋巴结转移相关，但与性别，年龄，肿瘤大小和病理类型无关。KAI1/CD82的高表达能抑制肺癌区域淋巴结的转移[4]， Choi UJ 等[5]证实KAI1/CD82的下降通过PI3K/Akt/mTOR信息传导路径对H1299肺癌细胞转移表型下调Rac1的表达。KAI1/CD82在大肠癌中阳性表达约55%，其表达和Dukes'分期，静脉侵犯，淋巴结转移，肿瘤分化程度和肝转移之间有统计上的显著相关。并且KAI1/CD82表达和Dukes分期被确定为重要和独立的预后因素[6]。KAI1/CD82表达的减弱或者缺失可能是肿瘤发生和发展的潜在因素。不少文献报道KAI1/CD82在通过Sprouty2的上调抑制肝癌细胞迁移，野生型p53和JunB的协同作用下，调节着肝癌细胞的KAI1/CD82的蛋白表达[8-9]。, 百拇医药(贾军等)