小儿轮状病毒感染免疫应答的研究(2)
1.2 检验方法①外周单个核细胞分离:在采集肝素抗凝血之后,加入等量的Ficoll分离液,离心20 min,取上层血浆存入-70℃冰箱中保存。将中间层细胞吸出,以氯化钠溶液(0.9%)进行冲洗,离心10分钟,留细胞沉淀。
②淋巴细胞亚群检测:采集50 μL肝素抗凝血,加入荧光标记体,然后混合均匀,于室温下避光30 min,加入450 μL溶血剂,混合均匀之后,静止20 min,进行流式细胞仪检测。
③细胞因子基因表达检测:将TRIzol1mL加入外周血单个细胞沉淀,于室温条件下保存5 min,加入氯仿200 μL,剧烈摇晃20 s,静止5 min。取上层置入Eppendorf管,再加入异丙醇500 μL,混合均匀,于室温条件下静止10 min,离心10 min。取上清液,以乙醇(70%)洗一次,离心5 min,在沉淀晾干后,加入3 μLDEPC水,检测260 nm与280 nmA值。
1.3 观察指标
以SPSS 22.0软件对所得数据进行处理分析,对计数资料以χ2检验,以例数百分比的形式表示,对计量资料以t检验,以(x±s)的形式表示,当P<0.05时,差异具有统计学意义 ......
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