免疫组化检测子宫内膜腺癌促性腺激素释放激素受体表达的临床价值(2)
1.2 方法
严格无菌操作将标本采集后一部分放入液氮中保存，一部分用10%甲醛固定，石蜡包埋，5 um连续切片备用。其中正常子宫内膜组织中处于增生期的19例，分泌期21例。按Trizol一步法提取组织样品总RNA，按反转录试剂盒说明进行RT反应，将RT产物保存与-20 ℃备用。将洗净的子宫内膜标本剪成1 mm×1 mm×1 mm小块，加入3倍体积左右的胶原酶溶液，在37℃、5%CO2暖箱内消化30～60 min，将得到的细胞悬液移入离心管内，清洗后离心3次，取沉淀接种到培养瓶，加DMEM培养基，在37 ℃、5%CO2暖箱内培养，24 h后去悬浮，加入新培养基继续培养，2～3 d后换液，在显微镜下观察细胞形态。培养细胞传代于内置盖玻片的六孔板，待细胞贴壁达70%，终止培养，倒掉培养基，加入95%酒精固定，用免疫细胞化学法鉴定培养细胞，同时进行免疫细胞化学检测。免疫组化以出现棕黄色细颗粒状物质为阳性 ......
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严格无菌操作将标本采集后一部分放入液氮中保存，一部分用10%甲醛固定，石蜡包埋，5 um连续切片备用。其中正常子宫内膜组织中处于增生期的19例，分泌期21例。按Trizol一步法提取组织样品总RNA，按反转录试剂盒说明进行RT反应，将RT产物保存与-20 ℃备用。将洗净的子宫内膜标本剪成1 mm×1 mm×1 mm小块，加入3倍体积左右的胶原酶溶液，在37℃、5%CO2暖箱内消化30～60 min，将得到的细胞悬液移入离心管内，清洗后离心3次，取沉淀接种到培养瓶，加DMEM培养基，在37 ℃、5%CO2暖箱内培养，24 h后去悬浮，加入新培养基继续培养，2～3 d后换液，在显微镜下观察细胞形态。培养细胞传代于内置盖玻片的六孔板，待细胞贴壁达70%，终止培养，倒掉培养基，加入95%酒精固定，用免疫细胞化学法鉴定培养细胞，同时进行免疫细胞化学检测。免疫组化以出现棕黄色细颗粒状物质为阳性 ......
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