药物性肝病患者髓过氧化物酶基因多态性分析(2)
1.2 仪器和试剂
Tap DNA聚合酶购自日本 Takara公司；限制性核酸内切酶 A ci l购自美国 NEB公司；PCR引物由上海博亚生物公司合成；凝胶图象扫描仪、Gene Amp 2400 PCR仪(美国ABI公司)。
1.3 MPO 基因多态性检测
1.3.1 DNA 提取 1 mL新鲜血液离心去掉上层血浆后，加入红细胞裂解液至红细胞溶血完全，将离心沉淀后的悬液添加 150 μL Solution I，应用旋涡混匀器震荡将其摇匀，时间约为 10～25 s，保存在恒温65 ℃的条件下，约30 min。在向其加入约300 μL的 Solution II 进行混匀，同样在65 ℃条件下保存，离心后去上清液。并在上清液中加入 250 μL 无水乙醇。然后取得的溶液进行离心吸附柱，向其中加入 500 μL 的Solution III，进行离心后，弃用柱液。再向其中添加Eppendorf15 000 rpm于管中，同时进行离心，约3 min，且收集管。将所得的离心吸附柱放在一个1.5 mL的离心管中，再次杀菌，且加入60 μL EluteSolution，65 ℃孵育 3 min，温度控制在 65 ℃的左右，最后应用15 000 rpm 离心，时间为 1 min，把所收集的 DNA 保存在 -20 ℃的冰箱中 ......
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Tap DNA聚合酶购自日本 Takara公司；限制性核酸内切酶 A ci l购自美国 NEB公司；PCR引物由上海博亚生物公司合成；凝胶图象扫描仪、Gene Amp 2400 PCR仪(美国ABI公司)。
1.3 MPO 基因多态性检测
1.3.1 DNA 提取 1 mL新鲜血液离心去掉上层血浆后，加入红细胞裂解液至红细胞溶血完全，将离心沉淀后的悬液添加 150 μL Solution I，应用旋涡混匀器震荡将其摇匀，时间约为 10～25 s，保存在恒温65 ℃的条件下，约30 min。在向其加入约300 μL的 Solution II 进行混匀，同样在65 ℃条件下保存，离心后去上清液。并在上清液中加入 250 μL 无水乙醇。然后取得的溶液进行离心吸附柱，向其中加入 500 μL 的Solution III，进行离心后，弃用柱液。再向其中添加Eppendorf15 000 rpm于管中，同时进行离心，约3 min，且收集管。将所得的离心吸附柱放在一个1.5 mL的离心管中，再次杀菌，且加入60 μL EluteSolution，65 ℃孵育 3 min，温度控制在 65 ℃的左右，最后应用15 000 rpm 离心，时间为 1 min，把所收集的 DNA 保存在 -20 ℃的冰箱中 ......
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