氯化锂对U251胶质瘤细胞增值及GSK—3β蛋白表达影响的研究(2)

http://www.100md.com 2016年7月15日 《中外医疗》2016年第20期

     1.2.2 流式细胞术检测细胞周期 以0、0.5、2.0、8.0、10、30 mM LiCl药物作用U251细胞24 h 后，将U251细胞消化制成细胞悬液，计数达到4×106个/mL，离心(1 000 r/min，5 min) 弃去培养液；PBS洗2次，离心(1 000 r/min，5 min)弃去 PBS ，加入- 20 ℃预冷的70 %乙醇，置于-20 ℃固定过夜。离心(1 000 r/min，5 min) 弃去固定液 ，PBS重悬2次×5min，离心(1 000 r/min， 5 min)后弃去 PBS；采用 PI染色液，室温避光染色5 min后上样 ， 样品计数达2.0×104个细胞 ， FACSCalibur型流式细胞仪检测U251细胞在细胞周期各时相所占的百分比。

    1.2.3 细胞免疫化学 用10%FBS的DMEM高糖培养液将U251细胞(对数生长期)制成悬浮细胞，并接种于24孔培养板中，培养2 h后，每孔加1 mL培养液。培养24 h后，分别加入1 mL的LiCL药物0、 0.5、2.0、8.0、10、 30 mM ......