PTEN、VEGF在人脑星形细胞瘤的表达及意义(2)
1.2 试剂
鼠抗人VEGF单克隆抗体，SP免疫组化试剂盒，鼠抗人PTEN克隆抗体。
1.3 检测方法
采用链酶亲和素- 生物素过氧化物酶复合物法(SP法)。阴性对照：I抗采用正常羊血清来代表，结果为阴性；阳性对照：用已知阳性的结肠癌作VEGF阳性对照，PTEN阳性表达的则将已知乳腺癌组织作为阳性对照；空白对照：I抗采用PBS来代表，结果为阴性。免疫组织化学染色步骤如下：①对石蜡切片标本进行脱蜡至水；②将标本放在H2O2(浓度为3%)内，保持常规室温，30 min。采用PBS洗3次，5 min/次；③备用塑料盒，并将枸橼酸盐抗原修复液置于塑料盒，将标本放在塑料盒内，并进行高压修复，持续时间为20 min；④待其自然冷却后，采用PBS洗3次，5 min/次；⑤将封闭血清(浓度为10%)滴在标本上，常规室温，持续30 min；⑥将血清去除，并将1：100稀释度的VEGF与PTEN的单克隆抗体分别滴加在切片上，将其置于温度为4℃的湿盒内，过夜，采用PBS洗3次，5 min/次；⑦将生物素化二抗工作液滴上，将其置于温度为37℃的湿盒内，持续30 min，采用PBS洗3次，5 min/次；⑧将链霉卵白素工作液滴上 ......
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鼠抗人VEGF单克隆抗体，SP免疫组化试剂盒，鼠抗人PTEN克隆抗体。
1.3 检测方法
采用链酶亲和素- 生物素过氧化物酶复合物法(SP法)。阴性对照：I抗采用正常羊血清来代表，结果为阴性；阳性对照：用已知阳性的结肠癌作VEGF阳性对照，PTEN阳性表达的则将已知乳腺癌组织作为阳性对照；空白对照：I抗采用PBS来代表，结果为阴性。免疫组织化学染色步骤如下：①对石蜡切片标本进行脱蜡至水；②将标本放在H2O2(浓度为3%)内，保持常规室温，30 min。采用PBS洗3次，5 min/次；③备用塑料盒，并将枸橼酸盐抗原修复液置于塑料盒，将标本放在塑料盒内，并进行高压修复，持续时间为20 min；④待其自然冷却后，采用PBS洗3次，5 min/次；⑤将封闭血清(浓度为10%)滴在标本上，常规室温，持续30 min；⑥将血清去除，并将1：100稀释度的VEGF与PTEN的单克隆抗体分别滴加在切片上，将其置于温度为4℃的湿盒内，过夜，采用PBS洗3次，5 min/次；⑦将生物素化二抗工作液滴上，将其置于温度为37℃的湿盒内，持续30 min，采用PBS洗3次，5 min/次；⑧将链霉卵白素工作液滴上 ......
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