脑脊液流式细胞术在儿童中枢神经系统白血病早期诊断中的意义(1)
[摘要] 目的 探讨脑脊液流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)在诊断儿童中枢神经系统白血病(Central Nervous System Leukemia，CNSL)中的意义。方法 采用单克隆抗体双重直接免疫荧光素标记法对2015年1 月—2016 年3月期间该院收治的45例可疑中枢神经系统浸润患儿的脑脊液进行细胞免疫表型分析，同时进行脑脊液细胞形态学(Conventional Cytology，CC)检测，比较两种方法的差异。结果 45例患儿中，FCM有15例发现异常免疫表型，阳性率为33.33%，CC发现9例存在原始幼稚细胞，阳性率为20%，两者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 脑脊液FCM在儿童CNSL的诊断中具有重要的临床意义。
[关键词] 流式细胞术；细胞形态学；脑脊液；中枢神经系统白血病
[中图分类号] R725.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2016)10(b)-0042-03
[Abstract] Objective To evaluate the value of flow cytometric of cerebrospinal fluid cells in the diagnosis of central nervous system leukemia in children. Methods Used Double immunofluorescence staining with monoclonal antibodies，45 cerebrospinal fluid samples who had central nervous system involvement was analyzed with flow cytometric immunophenotyping and conventional cytology in January 2015 to March 2016，the results of flow cytometry were compared with conventional cytology. Results The results showed that 33.33% children had abnormal cells by flow cytometry and 20% children had abnormal cells by conventional cell morphology in 45 cases。The difference had statistical significance (P < 0.01). Conclusion Flow cytometriy analysis of cerebrospinal fluid has important clinical significance in the diagnosis of CNSL in children。
[Key words] Flow cytometry；Conventional cytology；Cerebrospinal fluid；Immunophenotyping；Central nervous system leukemia
随着化疗方案的改进，我国儿童急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblastic leukemia，ALL)的疗效获得了显著改善，儿童ALL诱导缓解率高达91%～94%，5年无事件生存(EFS)率达70%～80%[1-3]。中枢神经系统白血病(Central Nervous System Leukemia，CNSL)是导致白血病化疗失败的主要原因之一，如何早期诊断CNSL具有重要意义。该文将对2015年1月—2016年3月期间45例急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia，ALL)的脑脊液进行分析，以研究脑脊液FCM在CNSL诊断中的意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
根据2014年制定的儿童 ALL诊疗建议(第四次修订)为诊断标准[4]，以明确诊断急性淋巴细胞性白血病的患儿为对象，方便选取该院收治的临床疑似中枢神经系统浸润45例进行脑脊液CC及FCM检测。符合以下任何一项，并除外其他原因导致的枢神经系统病变时，列为可疑中枢神经系统浸润病例：①有神经系统症状；②脑脊液常规白细胞计数大于5×106 个/L时；③头颅核磁或CT提示影像学病变。
1.2 脑脊液细胞常规计数
将留取无菌新鲜脑脊液标本2 mL充入细胞计数板，高倍镜下计数有核细胞数。
1.3 脑脊液细胞学检查
吸取 2～3 mL脑脊液，标本离心后涂片，干燥后进行瑞氏染色，显微镜下观察细胞形态，发现原始幼稚细胞则判定结果阳性。
1.4 FCM分析
采用单克隆抗体双重直接免疫荧光素(FITC/PE)标记法。留取2～3 mL新鲜脑脊液于无菌试管中，离心(1 400 r/min，5 min)后弃上清，留取100 μL，加入相应抗体，充分混匀，在室温、避光条件下孵育15 min，加入1 mL溶血素1 mL，混匀后避光，室温放置8 min，离心(1 400 r/min，5 min)弃上清，用PBS洗涤细胞，离心(1 400 r/min，5 min)后，弃上清，加入约3 mL PBS洗涤细胞，离心后弃上清，加入约100 μL PBS后，震荡混匀，立即上机检测。流式细胞仪及所有抗体来自美国BD公司。含六种荧光抗体标记：FICT、PE、APC、PerCP、APC-Cy7、PE-Cy7。
1.6 统计方法
采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。计数资料以例数表示，采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。阳性率指所检查标本中阳性结果所占比例。 (安美玉 陈芬)
[关键词] 流式细胞术；细胞形态学；脑脊液；中枢神经系统白血病
[中图分类号] R725.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2016)10(b)-0042-03
[Abstract] Objective To evaluate the value of flow cytometric of cerebrospinal fluid cells in the diagnosis of central nervous system leukemia in children. Methods Used Double immunofluorescence staining with monoclonal antibodies，45 cerebrospinal fluid samples who had central nervous system involvement was analyzed with flow cytometric immunophenotyping and conventional cytology in January 2015 to March 2016，the results of flow cytometry were compared with conventional cytology. Results The results showed that 33.33% children had abnormal cells by flow cytometry and 20% children had abnormal cells by conventional cell morphology in 45 cases。The difference had statistical significance (P < 0.01). Conclusion Flow cytometriy analysis of cerebrospinal fluid has important clinical significance in the diagnosis of CNSL in children。
[Key words] Flow cytometry；Conventional cytology；Cerebrospinal fluid；Immunophenotyping；Central nervous system leukemia
随着化疗方案的改进，我国儿童急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblastic leukemia，ALL)的疗效获得了显著改善，儿童ALL诱导缓解率高达91%～94%，5年无事件生存(EFS)率达70%～80%[1-3]。中枢神经系统白血病(Central Nervous System Leukemia，CNSL)是导致白血病化疗失败的主要原因之一，如何早期诊断CNSL具有重要意义。该文将对2015年1月—2016年3月期间45例急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia，ALL)的脑脊液进行分析，以研究脑脊液FCM在CNSL诊断中的意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
根据2014年制定的儿童 ALL诊疗建议(第四次修订)为诊断标准[4]，以明确诊断急性淋巴细胞性白血病的患儿为对象，方便选取该院收治的临床疑似中枢神经系统浸润45例进行脑脊液CC及FCM检测。符合以下任何一项，并除外其他原因导致的枢神经系统病变时，列为可疑中枢神经系统浸润病例：①有神经系统症状；②脑脊液常规白细胞计数大于5×106 个/L时；③头颅核磁或CT提示影像学病变。
1.2 脑脊液细胞常规计数
将留取无菌新鲜脑脊液标本2 mL充入细胞计数板，高倍镜下计数有核细胞数。
1.3 脑脊液细胞学检查
吸取 2～3 mL脑脊液，标本离心后涂片，干燥后进行瑞氏染色，显微镜下观察细胞形态，发现原始幼稚细胞则判定结果阳性。
1.4 FCM分析
采用单克隆抗体双重直接免疫荧光素(FITC/PE)标记法。留取2～3 mL新鲜脑脊液于无菌试管中，离心(1 400 r/min，5 min)后弃上清，留取100 μL，加入相应抗体，充分混匀，在室温、避光条件下孵育15 min，加入1 mL溶血素1 mL，混匀后避光，室温放置8 min，离心(1 400 r/min，5 min)弃上清，用PBS洗涤细胞，离心(1 400 r/min，5 min)后，弃上清，加入约3 mL PBS洗涤细胞，离心后弃上清，加入约100 μL PBS后，震荡混匀，立即上机检测。流式细胞仪及所有抗体来自美国BD公司。含六种荧光抗体标记：FICT、PE、APC、PerCP、APC-Cy7、PE-Cy7。
1.6 统计方法
采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。计数资料以例数表示，采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。阳性率指所检查标本中阳性结果所占比例。 (安美玉 陈芬)