风心病合并房颤患者心肌microRNA表达谱分析与靶基因预测(2)
1 资料与方法1.1 一般资料
整群选择该院心外科接受风心病瓣膜置换的患者,知情同意后入选。分两组:风心病合并房颤组14例,风心病无房颤组8例。采集患者右心耳心肌组织放入液氮冻存备用。
1.2 RNA抽提
Trizol法提取总RNA并检测其质量和含量,用琼脂糖电泳检测其完整性,质控标准:1.70.7,合格者用于后续研究。
1.3 miRNA芯片杂交
先分析总RNA,然后选用FlashTag Biotin HSR 标记试剂对样品进行标记后杂交,继而用 GeneChip杂交洗染试剂来洗染芯片,最后扫描得到图片和原始数据。
1.4 芯片结果的RT-PCR验证
1.4.1 引物设计 扩大样本量,挑取6个差异miRNAs进行组织验证,用Primer 5.0设计引物,U6 为内参照,见表1。
1.4.2 RT-PCR 扩增 反应体系为20 μL,10μL SYBR premix ex taq ......
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