1.2 方法

    T-SPOT.TB检测试剂盒由金域公司提供，英国牛津原装进口试剂，获得资质的专业技术人员检测。方法：使用肝素抗凝管收集住院患者清晨空腹外周血6 mL，按T-SPOT操作方法实验室分离外周血单个核细胞(PBMCS)，调整细胞悬液浓度至2.5≤105 cell/μL加入至4个微孔培养板(分别为阴性对照孔、A孔：ESAT-6、B孔：CFP-10和阳性对照孔)，微孔里预包被γ干扰素抗体，微孔中分别加入阴性对照的淋巴细胞无血清培养基、结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10、作为阳性对照的植物血凝素；置入37°含有5%的CO2培养箱中培养16～24 h，洗板，加入标记抗体工作液，2～8°孵育1 h后洗板，每个反应孔加入底物显色溶液室温孵育7 min，通风处干燥培养板，记数每个反应孔内深蓝色清晰斑点。结果判定：根据抗原A或抗原B孔的反应判断结果，阴性对照孔数为0～5，阳性样本应为：抗原A或抗原B斑点数减去阴性对照孔斑点数≥6；当阴性对照孔斑点数≥6，阳性样本应为抗原A或抗原B斑点数≥2倍阴性对照孔斑点数。

    1.3 观察指标

    记录两组患者T-SPOT.TB、结核抗体检测结果；分析不同方法检测的灵敏度及特异度；结核感染组不同CD4+T细胞计数条件下T-SPOT.TB检测阳性率；T-SPOT.TB阳性结果不同数值结核的诊断率 ......