1.2.3 分离富集CTCs与检测 将血液样本从采血管转移到样本保存管中，室温放置30 min后，离心去除上清，固定剂固定8 min，使用滤膜滤法富集得到CTCs。采用RNA-原位杂交法(RNA-ISH)检测CTCs上皮标志物、间质标志物和NF-kB mRNA。

    1.2.4 CTCs的判定标准 及阳性定义形态学标准：①细胞呈圆形、椭圆形或长形，直径大于10 μm；②光镜下可见完整细胞形态及细胞核；③荧光下细胞形态及边缘完整。RNA-ISH阳性信号标准：结果判定：由两位经培训实验员在荧光显微镜下分别观察细胞显色情况，按照以上标准采集阳性细胞图像并计数。若存在分歧，则由第三人或更多协助下共同判定结果。阳性界定值：目前尚无国际标准化CTCs的阳性界定标准，该研究以CTCs≥1判定为CTCs阳性结果。

    1.2.5 CTCs分型标准 根据EMT标志物，将CTCs分为：上皮型CTCs，上皮/间质混合型CTCs和间质型CTCs。上皮型CTCs：上皮标志物阳性；上皮/间质混合型CTCs：上皮标志物和间质型标志物阳性；间质型CTCs：间质型标志物阳性[2-3] ......