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编号:13088157
臭氧对大鼠星形胶质细胞作用的临床研究(2)
http://www.100md.com 2017年10月8日 《中外医疗》 2017年第17期
     (2)进行Ast的特征鉴定,即通过GFAP免疫细胞化学染色法进行特征的鉴定。③使用中性甲醛进行10~12 min的固定,而后使用过氧化酶进行阻断处理,时间以10 min为宜。②将鼠抗(一抗)-抗GFAP抗体置于温度为4℃的冰箱中过夜,而二抗则先放置于室温下10 min,链亲合素-过氧化酶溶液10 min,最后采用二氨基联苯胺进行显色。

    1.2.2 臭氧干预实验 采用24孔培养板承接细胞传代,每孔承接细胞接种以7×105个细胞为宜,然后于第2天将细胞贴壁牢固,并依据干预所用气体的不同将其均分至A、B、C 3组。3组均采用Giuseppe所用方法,即利用“Y”形三通连接管,连接两注射器,分别自臭氧发生器、氧气袋内抽取臭氧或氧气,然后将气体快速推至含有相同体积、相同组分的完全培养基中(CM)的注射器内,并连续摇动,3组摇动作用时间均以20 min为宜。其中,A组加入纯氧进行作用(一般以400 μL的纯氧作用20 min);B、C两组则分别加入400 μL的臭氧(O3)进行20 min的作用,其中B组所加臭氧规格为40 μg/mL,C组所加臭氧规格为80 μg/mL。作用完成后立即将3组细胞放回CO2孵育箱内,并分别于放回箱内的2 h和4 h收集其各自细胞上清液,并将细胞刮下后于冰浴中令其破碎。最后 ......
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