免疫组织化学和聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因研究(2)
1.2 方法1.2.1 免疫组织化学检测 取病理标本将其固定下来,在此过程中将4%甲醛充分利用起来,组织脱水,石蜡包埋,染色过程中将苏木精及弹力纤维充分利用起来,最后进行免疫组织化学染色。光学显微镜下观察乳腺癌易患基因1、人表皮因子受体2(Her2)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)、表皮生长因子受体(EGFR)等标志物,抗体在细胞膜、细胞核、细胞质表达,阳性细胞评定标准为有黄色或棕黄色颗粒出现[2],结果阳性的评定标准为同一切片内阳性细胞数/同类细胞数×100%>10%[3]。
1.2.2 聚合酶链反应(PCR)检测 将组织RNA提取出来,在液氮中放置组织,研磨成粉后在1 mL Trizol中放置50 g组织裂解,室温下进行5 min的静置,将200 μL氯仿加入,进行15 s的剧烈震荡,充分混合,室温下进行5 min的静置,4℃下以12 cm的半径、12 000 r/min的转速进行15 min的离心,分离心后混合物为3组,向1.5 mL离心管中移动上层水相,将异丙酚加入,其和Trizol的比例为0.5 mL:1 mL,充分混匀,室温下进行10 min的静置,4℃下以12 000 r/min的转速进行10 min的离心。在离心管侧面及底部,RNA会有白色沉淀形成,将上清弃去,将75%乙醇加入其中,比例为1:1,成分混匀,4℃下以10 600 r/min的转速进行5 min的离心 ......
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