1.4 RT-PCR

    Reverse Transcription-PCR是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。不同实验组的卵黄膜在取材时一部分用4%PFA固定，另外一部分需要加Trizol -80℃冰箱保存备RT-PCR。对吸收转运蛋白调控基因p185进行检测，观察咖啡因暴露对各组的表达差异情况。

    1.5 组蛋白H3(PH3)以及凋亡标记物TUNEL的免疫荧光

    通过形态学观察，胚胎随着暴露咖啡因剂量的增加，卵黄膜的组织形态受到了影响，转运营养的能力也受到了损伤，为了了解其发生发展的原理，对卵黄膜组织进行了细胞增殖和凋亡的检测。从卵黄囊细胞增殖分化的方向去分析其发育差异的原因：卵黄膜组织经4%PFA充分固定后，3%BSA封闭2 h，加一抗PH3(1：200) ，TUNEL(1：200)4℃冰箱过夜，PBS冲洗10 min×3，加二抗pH3(555) ，TUNEL(488)，冰冻切片进行拍照观察。

    1.6 统计方法

    通过SPSS 17.0统计学软件分析数据，计量资料(x±s)和计数资料[n(%)]分别采用t检验和χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 胚胎长度的统计分析

    单因素方差分析，正常组与中剂量组差异有统计学意义(P<0.05) ......