1 对象与方法

    1.1 研究对象

    方便收集1 702例在该院就诊并自愿接受宫颈HPV检查的妇女宫颈脱落细胞标本，该组中年龄18～70岁，平均年龄(48.5±4.3)岁。纳入标准为：未行子宫切除术；就诊前24 h无性生活，72 h无阴道用药史；就诊时为无月经期和非妊娠状态。

    1.2 标本采集

    用消毒灭菌的扩阴器打开宫颈口并用洁净棉拭子擦净分泌物，再将专用宫颈刷深入宫颈口2～3 cm处顺时针旋转4～5圈，获取宫颈脱落细胞。将标本放入装有细胞保存液的试管中拧紧瓶盖置于4℃保存，且在1周内完成检测。

    1.3 标本处理

    将标本管中样本液摇匀取200 uL装入1.5 mL的离心管中，将离心仪的转速调整为10 000 rpm离心5分钟，分离出上层清液，留沉淀(若样本有其他杂质如溶血或漂浮物，可以使用蒸馏水洗涤1～2次)。将阳性和阴性质控品解冻混匀，各取10 uL，分别加入1.5 mL的离心管。样本沉淀及质控品，分别加50 uL的DNA提取液混匀，煮沸10 min，将离心仪的转速调整为10 000 rpm离心5 min，取上层清液备用。

    1.4 PCR扩增

    取HPV23PCR反应管，解冻离心后(另换手套)，分别加入样本提取液或质控品提取液上清5 uL。PCR反应管液6 000 rpm瞬时离心，放入PCR仪，按下列程序条件扩增：50℃ 3 min、93℃5 min、93℃40 s、55℃40 s、72℃40 s×40个循环、72℃7 min、95℃5 min、4℃5 min ......