马士淇，李 璐，刘惠芬，郎锦义，黄建鸣

    (四川省肿瘤医院·研究所，成都 610041)

    鼻咽癌是我国南方地区的一种常见恶性肿瘤。目前主要治疗方法有放疗、手术、化疗等，其中放疗是首选治疗手段。但患者放疗后5年生存率仅为40%～50%，因而针对于鼻咽癌放射敏感性的研究引起临床的重视。人类表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是原癌基因 cerbB-1(HER-1)表达产生的一种酪氨酸激酶受体，研究表明在鼻咽癌细胞中EGFR存在大量表达，并和鼻咽癌的发生和发展有着密切关系[1]。传统的受体学说认为，EGFR是细胞膜受体，然而近年来在皮肤癌及肺癌等细胞中发现电离辐射、热休克、H2O2等应激条件能够激活EGFR并通过磷酸化其核定位信号序列(nuclear localization signal，NLS)上Thr654与输入素α和β相互作用而进入细胞核，在核内发挥转录调节和信号转导功能。在这些新的功能中，核EGFR促进应激情况下如电离辐射诱导的DNA双链断裂(double strands breaks，DSBs)的修复尤其重要。在高等真核生物中，非同源末端连接(non-homologous end-joining，NHEJ)在修复放疗介导的DNA损伤中扮演关键角色。NHEJ依赖于DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase，DNA-PK)。研究发现DNA-PK Thr2609的磷酸化对其在NHEJ中发挥作用至关重要，核EGFR可以通过与DNA-PK形成复合物影响其在细胞中的分布并作为一种蛋白激酶磷酸化DNA-PK Thr2609位残基，激活DNA-PK在NHEJ中发挥作用[2]。而这种作用机制在鼻咽癌治疗耐受研究中鲜有报道。基于EGFR与鼻咽癌发生发展的密切关系，本研究考察了辐射对鼻咽癌细胞EGFR核转位的影响，并初步探讨EGFR核转位抑制肽对鼻咽癌细胞辐射耐受相关分子DNA-PK表达的作用及其潜在的分子关联机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养

    人鼻咽癌CNE-1细胞株购自上海细胞库，用含10%灭活胎牛血清的RPMI1640培养液，在37℃、5%CO2及饱和湿度的条件下培养，每2～3天传代1次。

    1.2 合成抑制肽

    设计并合成与EGFR上的核定位序列(EGFRNLS)的序列相似性磷酸化多肽[Ac-RKRT(PO3H2)LRRLK]作为竞争抑制EGFR核转位的干扰药物 ......