林琼燕, 生秀杰， 刘娟, 熊汉真, 王沂峰

    510150广州，广州医科大学附属第三医院 妇产科(林琼燕、生秀杰、刘娟)， 病理科(熊汉真)； 510218广州,南方医科大学附属珠江医院 妇产科(王沂峰)

    应用基础研究?

    顺铂通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬*

    林琼燕, 生秀杰， 刘娟, 熊汉真, 王沂峰△

    510150广州，广州医科大学附属第三医院 妇产科(林琼燕、生秀杰、刘娟)， 病理科(熊汉真)； 510218广州,南方医科大学附属珠江医院 妇产科(王沂峰)

    目的探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法透射电镜观察自噬泡形成，免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 fusionprotein II，LC3II) 的荧光聚集情况。采用Westerblot检测mTOR通路中的PI3K、AKT及mTOR蛋白的表达。结果顺铂(20μg/mL)能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系及细胞培养 人子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa细胞由广州医科大学附属第三医院实验室保存。将其置入含10%新生小牛血清，含青霉素及链霉素的RPMI培养基，在37℃含CO2及饱和湿度的恒温培养箱内培养。

    1.1.2 主要试剂 注射用顺铂(冻干型)购自齐鲁制药有限公司；胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)购自北京义翘神州生物技术有限公司；胎牛血清及RPMI-1640培养基购自Hyclone公司。鼠单克隆PI3K p85抗体,鼠单克隆AKT1,兔多克隆AKT1(phospho S473)抗体,兔克隆mTOR抗体,兔多克隆微管相关蛋白1轻链3融合蛋白Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3 fusionprotein II,LC3II)抗体购自Abcam公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 透射电镜检测自噬小体 将Ishikawa细胞用20μg/mL顺铂处理0、12、24小时，估计细胞数达到106时应用0.25%胰蛋白酶消化收集细胞，1 500转/分钟离心10分钟弃培养基,缓慢注入2%多聚甲醛和0.1%戊二醛 ......