程小峰,高春玲,谈文娟，王笑良，张蓓蓓，张娇，章志勇

    361001 福建 厦门， 厦门大学附属成功医院(中国人民解放军第174医院) 放射治疗科(程小峰、高春玲、王笑良、张蓓蓓、张娇、章志勇) 361001 福建 厦门, 厦门大学医学院(谈文娟)

    血管内皮抑制因子(VEGI)是一种新型的抗血管生成抑制剂，能够凋亡增殖的血管内皮细胞，抑制新生血管形成。VEGI主要由血管内皮细胞和树突状细胞分泌，为多功能性小分子蛋白，发挥抑制新生血管形成的功能[1-2]。VEGI 有3种同工型， 最早发现的VEGI-174, 又称为TL1， 后来又发现了由全长基因序列编码的VEGI-251 (TLIA) 和VEGI-192，这3种同工型在结构和功能上均具有一定的差异。可溶性的VEGI对结肠癌等恶性肿瘤表现出较好的反应率。体外实验表明，VEGI能显著抑制牛动脉内皮细胞与人脐静脉内皮细胞的增殖。此外，VEGI还能抑制内皮细胞形成血管状结构。体内实验研究显示，VEGI蛋白的胞外区(23～174位氨基酸)显著抑制同系移植的大肠癌MC-38的生长，且肿瘤血管化程度显著降低；同样，在浆细胞瘤异体肿瘤移植模型中，以上VEGI胞外区可有效抑制异体移植的肿瘤生长[3]。

    VEGI-192是最晚被发现的VEGI亚型，能强力地抑制新生血管生成，显著抑制肿瘤生长，并且对肝肾几乎无毒性[4]。Wu等[5]研究发现无论在体或者体外，VEGI-192都能够有效的抑制MDA-MB-435乳腺癌细胞的增殖。在本研究中，我们试图通过973肺腺癌裸鼠移植瘤模型，评估rhVEGI-192对放射线有无增敏效应，并初步研究其作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 动物及细胞株

    雄性裸鼠，4～5周龄，体重20g左右，购自厦门大学实验动物中心。研究获得厦门大学医学院医学伦理委员会同意，动物饲养及给药处理严格遵守国家动物饲养和使用安全规范。rhVEGI-192菌株由李鲁远教授惠赠，蛋白由实验室自主提取。细胞株为973细胞株，厦门大学抗癌研究中心惠赠。

    1.2 rhVEGI-192的制备

    将融化后的细菌轻轻吹吸混匀，向每个离心管中加入50ul 细菌和500ul高压无菌的LB(LuriaBertani broth)培养基中，混匀后置于37℃,50rpm培养1h，使细菌复苏。将已复苏的细菌轻轻吹吸混匀，吸取200ul转接到200ml含有氨苄西林(50ug/ml)的LB培养基，混匀后置于28℃,200rpm，培养过夜 ......