王婕，张妙，吕欣桐，乔俏

    110001 沈阳，中国医科大学附属第一医院 放射治疗科

    头颈部肿瘤是全球第六大常见恶性肿瘤，也是发展中国家第三大常见肿瘤。其中口咽癌约占4.2%。放射治疗是其主要的治疗方法之一。尽管近几年来放疗治疗技术取得了很大进步，但近半个世纪来其5年生存率始终徘徊在50%[1]。因此，寻求有效途径抑制口腔癌细胞增殖，提高其治愈率是目前亟待解决的问题。有文献表明，内质网应激通路PERK-eIF2α可激活细胞中的自我保护机制从而抑制细胞凋亡[2]。而核因子κB(NF-κB)可以抑制细胞凋亡，并已在胶质瘤、甲状腺癌等其它恶性肿瘤中得到证实[3-4]。因此，我们认为通过抑制内质网应激信号通路PERK-eIF2α介导NF-κB或可诱导口咽癌细胞凋亡。本研究以口咽鳞癌细胞系(Fadu、Detroit 562)为细胞模型，探讨内质网应激信号通路PERK-eIF2α参与调控口咽癌细胞增殖具体机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    MEM、RPMI 1640和胎牛血清购自于美国GIBCO公司。GSK2606414购自德国Calbiochem公司。Bay11-7082、DMSO、RIPA裂解液、FITC Annexin V 凋亡检测试剂盒(APOAF)购自于美国Sigma公司。Negative siRNA、PERK siRNA、eIF2α siRNA和转染试剂DharmaFECT 1购自于美国Dharmacon公司。phospho-eIF2α、phospho-p65、p65、兔抗人β-actin购自于美国Cell Signaling公司。Thapsigargin、PERK购自于英国Abcam公司。MTT试剂盒、BCA浓度测定试剂盒、Western Blot实验相关试剂购买于中国碧云天生物科技公司。

    1.2 细胞培养及转染

    本研究选用HPV(-)的口咽鳞癌Fadu细胞株和Detroit 562细胞株。Fadu细胞用含有10%胎牛血清的MEM培养瓶、Detroit 562细胞用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养瓶在37 ℃、5% CO2饱和湿度的恒温培养箱中培养，2～3 d传代1次，观察细胞生长情况，待细胞种植密度为70%～80%时，将Negative siRNA、PERK siRNA、eIF2α siRNA、转染试剂DharmaFECT 1和培养液按实验要求混合后分别加入各组培养皿中，24 h后更换新鲜培养液，48～60 h收取细胞。

    1.3 MTT实验 ......