陈燕，刘芷兮 综述，肖洪涛 审校

    610041成都，四川省肿瘤医院·研究所，四川省癌症防治中心，电子科技大学医学院 临床药学部(陈燕、刘芷兮、肖洪涛);610072成都，个体化药物治疗四川省重点实验室(肖洪涛)

    成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat，CRISPR)由一系列短的高度保守的正向重复序列与长度相似的间隔序列排列组成。相关核酸酶9(Cas9)基因编码的蛋白质不仅具有与核酸结合的功能，还具有与核酸酶、聚合酶、解旋酶等酶结合的活性。基于CRISPR-Cas9系统的作用原理，研究人员通过体外人工合成引导RNA(guide RNA，gRNA)成功实现对特定基因片段的精确靶向与剪切，由此开创了一种由gRNA的指导、Cas9定位于特定的基因序列上对DNA双链进行切割的新型基因编辑技术。该项技术与传统的锌指核酸酶(zincfinger nucleases，ZFNs)和转录激活样因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nudeases,TALEN)基因编辑技术相比，具有编辑效率更高、操作步骤更简单、价格更适宜以及编辑范围更为广泛等优势。

    肿瘤的发生与发展是一个由多基因参与的、不同信号通路相互调控与作用的复杂过程。同一基因在不同肿瘤、不同阶段、不同患者中时常发挥着截然不同的生物信息学作用。过去肿瘤的基因组学研究多局限于全基因组关联分析等观察层面上，近年来随着CRIPSR-Cas9基因编辑技术的深入研究，使得肿瘤治疗从基因治疗层面上取得了较多的应用成果。本文就CRISPR-Cas9基因编辑技术在构建肿瘤细胞模型研究与应用中的新进展进行综述，旨在为肿瘤临床前研究提供新的思路和策略。

    1 CRISPR-Cas 9基因编辑技术

    1.1 技术简介

    CRISPR-Cas系统在自然界中分为 3 种类型[1]，在基因编辑技术中最常使用的是Ⅱ型 CRISPR-Cas9系统。该系统包含 3 个核心元件，CRISPR RNA(cr RNA)、Cas9 蛋白、反式激活RNA(trans-activating RNA，tracr RNA)。cr RNA和tracr RNA 部分互补配对形成一股双链RNA，再由发挥引导作用的 Cas9 靶向切割目标DNA，因此该双链RNA通常又称为导向RNA(gRNA)[1]。Jinek等[2]将CRISPR-Cas9系统中的双链gRNA创造性的改造为单链gRNA (single guide ......