王静，李灵敏，刘晓峰,樊代明

    250000 济南，中国人民解放军联勤保障部队第九六〇医院 消化内科(王静、李灵敏、刘晓峰)；710032 西安，空军军医大学西京消化病医院 肿瘤生物学国家重点实验室(王静、樊代明)

    胃癌是全球致死率第三的恶性肿瘤[1]，也是我国发病率最高的消化道恶性肿瘤，进展期胃癌患者的5年生存率仅约20%[2]。因此，探讨胃癌恶性进展的关键分子机制，是预防胃癌转移、改善患者预后的关键环节。叉头框蛋白J1(forkhead box J1, FOXJ1)在胃弯曲的发育形成中发挥重要转录调控功能[3]。我们前期率先发现FOXJ1是抑制胃癌增殖和转移的重要转录因子，并可作为影响胃癌患者生存的独立预测因素[4]。然而FOXJ1在胃癌中的作用机制仍未明确。

    胃癌的侵袭转移是一个多阶段进展过程，而细胞外基质(extracellular matrix，ECM)降解、基底膜破坏是肿瘤细胞转移最初环节。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)可降解ECM，有利于肿瘤细胞穿破基底膜，发生浸润和远处转移。其中，IV型胶原酶MMP-2、MMP-9的作用最为直接[5]。我们前期发现FOXJ1可抑制胃癌细胞分解Matrigel从而穿过微孔滤膜的能力[4]，而Matrigel的主要成分即为Ⅳ型胶原、层黏连蛋白等。另外，Wnt/β-catenin通路异常活化在胃癌的增殖、侵袭、转移、耐药等多种病理过程均发挥重要作用[6]。有研究报道，FOXJ1-Wnt/β-catenin轴调控斑马鱼Kuffer’s囊泡纤毛的形成[7]，Wnt通路可能是FOXJ1转录调控纤毛形成网络中的重要通路[8]。因此，本研究针对参与肿瘤侵袭转移的关键分子MMPs和通路Wnt/β-catenin，探讨FOXJ1抑制胃癌转移的分子机制，为进一步拓展对胃癌转移信号通路的新认识、开发干预胃癌转移的潜在靶点提供新的思路。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养

    高/低转移潜能胃癌细胞系MKN28M/MKN28NM由空军军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室建立并保存，即将人胃癌细胞系MKN28经反复Transwell迁移和侵袭实验筛选获得的高/低转移潜能胃癌细胞亚系，病毒包装细胞293T购自ATCC。MKN28M-FOXJ1、MKN28M-control、MKN28NM-shFOXJ1、MKN28NM-shcontrol使用含2 μg/mL嘌呤霉素的完全培养基常规培养。

    1.2 慢病毒稳定转染细胞系建立 ......