白宁，刘春燕，李颖，张晓乐，侯德强

    214000江苏 无锡，江南大学附属医院 内分泌科(白宁、刘春燕、李颖、张晓乐)，口腔科(侯德强)

    甲状腺癌是一种起源于甲状腺滤泡上皮细胞的恶性肿瘤，近年来其发病率呈上升趋势。尽管经手术、放射性碘和促甲状腺激素抑制等序贯治疗后甲状腺癌患者临床预后良好，但仍有5%～10%患者发生甲状腺或颈部淋巴结以外的转移，预后较差[1]。因此，探索可靠的预后标志物和转移机制对甲状腺癌患者的诊疗具有重要意义。核苷酸结合寡聚结构域1(nucleotide-binding oligomerization domain 1，NOD1)，又称CARD4和NLRC1，是一种胞浆内模式识别受体，广泛表达于所有细胞类型，在免疫反应中起关键作用。近年来，NOD1已被证明可以调节癌症的进展，包括乳腺癌、肝细胞癌和结肠癌[2-4]。然而NOD1对甲状腺癌细胞的影响尚不清楚。本研究通过siRNA干扰甲状腺癌细胞中NOD1表达，进而确定NOD1对甲状腺癌的调控作用及分子机制，为甲状腺癌治疗策略的制定提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株与试剂

    人甲状腺癌细胞株BPCPA购自中国典型培养物保藏中心。NOD1 siRNA购自上海吉玛制药公司。Lipofectamine 2000试剂、TRIzol试剂、RIPA裂解液、Maxima H Minus第一链 cDNA合成试剂盒购自美国Thermo公司。TB Green预混试剂日本Takara公司。EdU试剂盒购自广州锐博生物公司。蛋白上样缓冲液、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、结晶紫染色液购自上海碧云天生物公司。细胞周期检测试剂盒购自南京凯基生物公司。兔抗人NOD1单克隆抗体、兔抗人GAPDH单克隆抗体、兔抗人p-P38单克隆抗体、兔抗人P38单克隆抗体、兔抗人p-ERK单克隆抗体、兔抗人ERK单克隆抗体和山羊抗兔IgG H&L(HRP)购自美国Abcam公司。

    1.2 细胞培养

    常规复苏人甲状腺癌细胞株BCPAP，培养基为含10%FBS、100 U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素的DMEM培养基。细胞置于37℃、5% CO2的恒温生物培养箱培养。

    1.3 细胞转染

    将1×106个细胞种植于6孔板，待细胞密度达到70%左右进行转染。取10 μL Lipofectamine 2000试剂与250 μL Opti-MEM培养基混合，取10 μL siRNA混合于250 μL Opti-MEM培养基 ......