刘嘉玉，李泽颖，陈玲燕，梅杰，马涛，张岩

    214122 江苏 无锡，江南大学无锡医学院无锡市妇幼保健院 乳腺外科(刘嘉玉、马涛、张岩)； 214023江苏 无锡，南京医科大学 无锡临床医学院(李泽颖、陈玲燕、梅杰)

    2020 年，女性乳腺癌的发病率已超过肺癌，占据全球癌症发病率榜首，估计有230 万例新发病例，占所有癌症新病例的11.7%[1]。随着乳腺癌早期筛查、诊断和治疗方案的进步，患者的存活率已有所提高。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类内源性的非编码单链RNA，可结合靶基因mRNA 的3’-UTR 区，在转录水平使mRNA 降解或在翻译水平抑制蛋白表达，其功能取决于与靶序列mRNA 的互补程度[2]。miRNA 表达异常可引起下游基因或信号通路的状态发生改变，从而调控细胞增殖、凋亡、迁移等生物学现象[3]。癌症生物学的最新进展发现，除了表观基因组的修饰，miRNA失调也可作为恶性肿瘤发生和转移的标志。在乳腺癌中，miRNA 可通过调控DNA 和组蛋白修饰从而造成乳腺癌表观遗传学的变化[4]，同时miRNA也可作为乳腺癌早期发展的生物标记物，为其靶向治疗提供指导[5]。有研究发现，miR-30 家族，包括miR-30a、miR-30b、miR-30c、miR-30d 和miR-30e等，均可作为乳腺癌骨转移抑制因子[6]，且有研究证实miR-30e-5p 可通过调节异黏蛋白来抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移[7]。然而，miR-30e-5p 对乳腺癌细胞恶性表型的机制研究还相对较少。P53 是经典的抑癌基因，其失活会促进乳腺肿瘤的进展，尤其是在预后不良的三阴性乳腺癌中更为明显[8]。P53 介导的miRNA 相关通路进而影响肿瘤细胞恶性表型的机制还有待进一步发掘。基于此，本文旨在探讨P53 介导的miR-30e-5p 对乳腺癌细胞生物学行为的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养与转染

    人乳癌腺细胞系MCF-7、MDA-MB-453 购自江苏凯基生物技术股份有限公司。使用含10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的RPMI-1640 培养基培养MCF-7 和MDA-MB-453 细胞，培养条件：温度为37℃，5%CO2。为进行后续试验，利用Lipofectamine 3000(Invitrogen) 对MCF-7 和MDA-MB-453细胞进行转染操作。转染的基本步骤：先将1.5 μL Lipo3000 转染试剂加入25 μL 的Opti-MEM 培养液中混匀 ......