李康 ，颜和芳 ，赵蔚 ，罗艺 ，徐文莉 ，廖长征 ，张洪德

    (1、龙岗中心医院，深圳 龙岗518116；2、宝安区慢性病防治院，深圳 宝安518126)

    乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是一种严重危害人类健康的传染病，我国是HBV高流行区，约9.7%的人为HBV携带者[1]。乙型肝炎病毒(HBV)性传播途径已研究多年并被基本证实[2，3]，但既往研究主要基于宏观流行病学研究和动物实验，尚未找到人与人之间HBV性传播的确切证据。近年来，随着分子流行病学的发展，越来越多的传染病传播途径通过分子进化分析在分子水平得到证实[4]。本研究选择疑似发生HBV性传播的夫妻，使用基因序列比对及基因进化树分析等分子流行病学方法分析其所染HBV S基因，试图从分子水平证实HBV存在性传播途径。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 从2010年来深圳市龙岗中心医院体检科做婚检的夫妻中按照乙肝表面抗原结果筛选出女方阳性而男方阴性的夫妻36对，除5对男方注射乙肝疫苗而乙肝表面抗体阳性外，其余31对夫妻中男方乙肝两对半均为全阴性。对这31名男性乙肝表面抗原每年随访检测一次，至2014年，其中10名男性乙肝表面抗原由阴性变为阳性，且期间夫妻双方均无输血史。此10对夫妻作为病例组，女方使用一次性无菌采样管采集阴道分泌物标本，每管加入无菌生理盐水1ml，震荡混匀，分别标记为W1-W10，-80℃保存；男方采集静脉血分离血清，分别标记为H1-H10，-80℃保存。另外随机选择10名来深圳市龙岗中心医院感染科就诊的血HBV-DNA阳性的男性乙型肝炎患者与上述10夫妻中女方随机配对作为对照组，采集其静脉血分离血清，分别标记为U1-10，-80℃保存。病例组与对照组年龄、体重均无显著性差异。

    1.2 DNA提取 解冻阴道分泌物和血清标本。阴道分泌物充分震荡混匀后，吸取1ml至1.5ml离心管中，12000r/min离心5min，吸弃上清液，每管保留50μl上清液，勿触及底部细胞团，重新漩涡震荡后备用。向50μl阴道分泌物、血清标本中分别加入150μl含0.5%十二烷基磺酸钠 (SDS) ......