登革病毒实验室检测方法研究进展
登革热,唾液,阳性率,一登革病毒的结构与型别,二登革病毒的实验室检测,1病毒分离,2血清学检测,3分子生物学检测,三总结与展望
王倩,刘师文,龚甜(江西省疾病预防控制中心, 江西 南昌330029)
登革病毒经伊蚊叮咬传播,可引起登革热,严重者还可引起登革出血热以及登革休克综合征。患有登革热的病人会主要会出现发热、皮疹、关节痛、颜面潮红、胸部发红出血、全身肌肉酸痛等症状,严重者会出现心肌损伤以及肾功能损伤,登革休克综合征是登革病毒感染最严重的临床表现,其主要症状为全身循环衰竭[1],而在发病的早期这些症状表现为轻微并且与其他上呼吸道疾病有类似的临床症状[2-3],易误诊。 人体对登革病毒普遍易感,首次感染后会产生特异性抗体并可维持多年,当再次感染其他型别登革病毒时, 会因为抗体依赖感染增强作用 (Antibody dependent enhancement,ADE) 出现更严重的症状并发展为重症登革热。 登革病毒的实验室快速检测对于及时诊断、减少重症病例的发生和登革热疫情的防控非常重要,本文阐述了登革病毒的实验室检测方法,对近年来登革病毒的检测技术进行综述。
一 登革病毒的结构与型别
登革病毒为单股正链RNA 病毒, 是黄病毒科、黄病毒属,基因组全长约11kb[4]。基因组由1 个开放阅读框(Open reading frame,ORF)和非编码区(5’UTR,3′UTR) 组成,ORF 可翻译和加工为三种结构蛋白和七种非结构蛋白, 分别为衣壳蛋白(C蛋白)、膜蛋白(M 蛋白)和包膜蛋白(E 蛋白)以及NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B 和NS5。 E 蛋白主要起中和反应, 抗体交叉反应也由其引发;NS1 基因长约1056bp, 编码的NS1 蛋白是登革病毒非结构蛋白中唯一的糖蛋白, 该糖蛋白在登革病毒4 个分型中均具有较高的稳定性, 可在感染细胞的表面表达,并且可以分泌到细胞外[5]。NS3 和NS5 主要对基因组的复制和蛋白的加工起催化作用;NS2A、NS2B、NS4A 和NS4B 作为转膜蛋白,功能是将NS3 和NS5 转运到内质网囊泡上[6]。5′端的I 型帽子结构可以保护其免受酶降解,同时促进翻译;3′ 端无poly(A)尾结构,高度保守,可能与病毒复制相关[7-8]。 登革病毒与其他黄病毒(包括黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒和蜱传脑炎病毒等) 之间约有40%的氨基酸相似性[9],这也是导致登革病毒与其他黄病毒检测中存在交叉反应的原因之一。 DENV 根据病毒包膜蛋白E 的抗原性不同,分为4 个血清型(DENV1-4),而同一血清型病毒之间往往还存在若干不同亚型,研究表明,同一血清型的不同亚型之间存在约3%的氨基酸水平差异和6%的核苷酸水平差异[10] ......
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