朱丹 陈卫国 杜婵娟 付岗 黄兴振 付书婕 赵有林 蒋伟哲

    金线莲[Anoectochilusroxburghii(Wall.) Lindl]为兰科的药用植物，生长在土壤腐殖质较多、光线较弱、相对湿度大的阔叶林中[1]，具有保肝、防癌、抗氧化、抗炎等多种药理作用[2]。近年来，因其生长环境遭到严重破坏，野生资源被过度采挖，加之具有繁殖率低、生长缓慢等特点，使得金线莲野生资源濒临灭绝[3]。在野生状态下，所有兰科植物都与真菌共生[4-5]，野生金线莲亦与内生真菌形成菌根共生关系，筛选促进金线莲生长发育的益生菌，研究它们的相互作用具有重大的理论意义。本课题组在广西桂林等地采集野生金线莲，并从该植物根中分离出多株菌根真菌，研究发现，这些真菌可以增加植物芽和根的数量，促进金线莲试管苗的生长。为了进一步研究菌根真菌对金线莲生长发育的影响，课题组对金线莲菌根真菌进行分离，并采用分子技术结合形态学特征对分离物进行鉴定，为下一步研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 菌根真菌的分离和形态学观察

    采集野生金线莲植株，取其根部用无菌水冲洗干净，切成0.5～1 cm小段，75%乙醇表面消毒3～5秒，无菌水冲洗净消毒液后，再用0.1%HgCl2表面消毒6～8分钟，无菌水冲洗后将根段接种于PDA平皿内，25℃恒温培养，待从根内长出真菌菌丝后，挑取尖端菌丝纯化培养。将纯化的6株真菌菌株(编号分别为2、5、6、A12、A46、A55)在PDA培养基(马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂17 g、水1000 ml)平板上于28℃恒温下黑暗培养，每天观察菌落的形态特征和颜色变化 ......