肝损伤活性研究
鳖甲,药组,酒精性,1材料与方法,1动物,2药物和试剂,3仪器,4动物分组,5给药与造模,6取材,7观测指标,8统计学处理,2结果,1小鼠体重及外观行为变化,2小鼠血清ALT,AST比较,3小鼠肝脏肝体指数,SOD,MDA比较,4小鼠肝组织病理
徐士勋 王咪娜 林锦旋 程亚涛 王艳慧 绪扩 张宇忠 雷海民目前酒精滥用已经成为世界性的危害,长期大量饮酒对肝脏有直接毒害作用,从而引发酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)。在中国ALD发病率呈逐年上升趋势,已经严重威胁了人民健康[1],酒精性肝病已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病[2]。
近年来中医中药防治酒精性肝病的临床和实验研究已有报道[3],鳖甲作为一味常用的保肝、护肝良药[4-6],本课题组从醋炙鳖甲中分离获得寡肽I-C-F-6,通过药理研究证实该物质对CCl4诱导的急性肝损伤具有防护作用,初步推断其机理可能与提升肝脏内抗氧化酶谷胱甘肽还原酶及谷胱甘肽过氧化物酶与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性有关[7-8]。临床和实验研究报道,鳖甲对酒精引起的肝病也具有一定临床应用[9-10],因此本实验探讨了其对小鼠急性酒精性肝损伤的作用。
本实验采用预先注射给药30天后以60%酒精灌胃3次诱导建立小鼠急性肝损伤模型,考察各实验组血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)酶含量及肝脏SOD活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及肝组织病理学检查,观察并分析评价鳖甲寡肽化合物I-C-F-6防治酒精致小鼠急性肝损伤效果,深入研究了该化合物的肝保护作用,为寡肽I-C-F-6用于临床防治酒精性肝病提供一定的实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物
健康雄性ICR小鼠18~20 g,北京中医药大学实验动物中心提供,实验动物生产许可证SCXK(京)2012-0001。
1.2 药物和试剂
鳖甲寡肽I-C-F-6(序列:GAGPHGG,纯度大于98%),实验室从醋炙鳖甲中分离纯化确证结构,委托上海科肽生物科技有限公司合成。乙醇,生理盐水,双蒸水。ALT试剂盒、AST试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒,均购自南京建成生物工程研究所,其它试剂均为国产分析纯,均购自北京化工厂。
1.3 仪器
万分之一分析天平(上海分析仪器厂);TDL-5-A CENTRZFUGE 高速离心机(飞鸽牌);DK-98-I 型恒温水浴锅;注射器(常州悦康医疗器械有限公司);RM2015 组织切片机( Leicainstruments Ltd. );Nikon ECLIPSE90i显微镜 ......
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