余春霞 臧艺玫 顾选 吴浩忠 马长华 韩丽 刘春生 赵百孝

    ·巴西草药研究专题·

    基于性状—显微—DNA条形码联用的巴西牛至属植物药HORTELA基原鉴定研究

    余春霞 臧艺玫 顾选 吴浩忠 马长华 韩丽 刘春生 赵百孝

    目的 利用性状—显微—DNA条形码联用的方法对巴西牛至属植物药HORTELA进行基原鉴定研究。方法 应用性状鉴定的方法初步对药材进行真伪鉴别;再应用显微鉴定的方法验证性状鉴定结果;最后提取样品DNA,扩增ITS序列,利用NCBI数据库中的BLAST功能分析相似度,对样品品种进行DNA条形码鉴定。结果 性状—显微—DNA条形码综合分析结果表明,该样品为牛至属植物Origanum elongatum(Bonnet)Emb.&Maire.的干燥地上部分。结论 HORTELA可能为多基原植物类药材,其来源为牛至属Origanum elongatum(Bonnet)Emb.&Maire.和薄荷属Mentha rotundifolia(Linn.)Huds.干燥地上部分。

    牛至属; 基原鉴定; DNA条形码

    巴西草药HORTELA是巴西民族的常用药,作者在巴西市场收集药材样本时发现,HORTELA被人们当做圆叶薄荷Mentha Rotundifolia(又称为Menthasuaveolens)出售及使用,但初步观察其性状与圆叶薄荷并不完全相同,因此有必要对该药材进行基原鉴定研究。

    传统的植物药鉴定有性状鉴定和显微鉴定等,二者的优点是简单、易行,不足之处是其主观性较强,且对属内近缘种药材的鉴别能力较差[1-2]。DNA条形码鉴定技术具有高效、准确、客观优点[3-4],其中内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列应用最为广泛[5-6]。本文提出性状—显微—DNA条形码联用的方法对植物药进行鉴定,首先通过性状鉴定初步对药材进行真伪鉴别,再用显微鉴定的方法验证性状鉴定结果,然后应用DNA条形码鉴定的方法,利用NCBI核酸数据库中已注册的ITS序列进行相似度分析,确定待测样品的品种。

    本实验拟采用性状—显微—DNA条形码联用的方法对巴西植物药HORTELA进行基原鉴定,为保证其质量及安全用药提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    HORTELA药材10份,每份200 g,2012年4月购买于巴西隆城市场药材集散地。样品的凭证标本保存于北京中医药大学大学标本室。

    1.2 试剂

    广谱植物基因组 DNA快速提取试剂盒(北京博迈德生物有限公司,批号:69632855);rTaq酶(上海生工生物工程有限公司,批号:695672BE);乙醇(北京化工厂,批号:1124120381060079);琼脂糖(BIOWEST,批号:142045);ddH2O等 ......