臧艺玫 顾选 余春霞 肖瑶 赵百孝 刘春生 马长华 韩丽

    基于DNA条形码—产地—形态分析联用的巴西马钱属植物药QUINA基原鉴定研究

    臧艺玫 顾选 余春霞 肖瑶 赵百孝 刘春生 马长华 韩丽

    目的 通过DNA条形码—产地—形态分析联用的方法对巴西马钱属植物药QUINA进行基原鉴定研究,为这种药材的开发利用提供依据。方法 通过提取样品DNA、PCR扩增及双向测序,获得样品的内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列,利用NCBI数据库中的BLAST功能计算相似度,对其基原进行DNA条形码鉴定;根据其产地信息对DNA条形码鉴定结果进行筛选和分析;依据其形态特征验证鉴定结果。结果 本次收集的植物类药材QUINA来源于马钱科马钱属植物Strychnos pseudo quina A.St.-Hil.的根皮。结论 DNA条形码—产地—形态三者联用的方法可弥补单一鉴定方法的不足,能够快速、准确的对未知样品进行基原鉴定。

    马钱属; ITS序列; 基原鉴定

    巴西蕴含丰富的植物资源[1],其中许多植物具有药用价值[2]。由于没有植物药药典,巴西植物药的品种鉴别主要依靠口授家传[3],导致其药材市场伪品混杂。因此,建立一套规范化的基原鉴定方法对保证巴西植物药的用药安全具有重要意义。

    随着分子生物学的发展,DNA条形码技术为物种鉴定提供了新的依据,其具有准确、快速、能鉴别无背景信息物种的优点[4-7],但由于存在相似度阈值等问题,仅依靠DNA条形码鉴定不能准确完成物种鉴定,还需结合该属物种在巴西的分布情况对数据库中的物种进行筛选,最终参照文献核对该物种的性状和显微特征,判断入药部位的合理性。

    巴西将可以提取到奎宁成分的29种苦味植物药统称QUINA[8],但这些不同来源的植物药中其他的化学成分差异较大,药理作用也不甚相同,一旦混用将带来严重的安全隐患。作者在巴西市场收集药材样本时发现名为QUINA的药材,其基原可能为马钱属植物,但品种难以确定。本文尝试利用DNA条形码—产地—形态分析联用的方法对缺少背景信息的该马钱属植物药进行基原鉴定研究,为其安全、正确的使用提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    QUINA药材3份,每份200 g,2012年4月购买于巴西隆城市场药材集散地。样品的凭证标本保存于北京中医药大学大学标本室。

    1.2 试剂

    广谱植物基因组 DNA快速提取试剂盒(北京博迈德生物有限公司,批号:69632855);rTaq酶(上海生工生物工程有限公司,批号:695671BE)、乙醇(北京化工厂,批号:1124120381060079);琼脂糖(BIOWEST,批号:142045);ddH2O等 ......