陈 伟 田 鲁 李 易 王 港 高 珊

    苦瓜总皂苷对2型糖尿病肾病大鼠肾脏组织中HIF-1α和VEGF表达的作用研究

    陈伟田鲁李易王港高珊

    目的 评价苦瓜总皂苷治疗2型糖尿病肾病大鼠的疗效。方法 雄性SD大鼠随机分为正常组、2型糖尿病肾病组(模型组)以及苦瓜总皂苷组(治疗组)，每组16只，比较治疗4周后、8周后HIF-1α和VEGF表达特点。结果 与模型组相比，治疗组尿蛋白和血清肌酐明显减少，血糖明显升高(P1 材料与方法

    1.1动物和试剂盒及仪器

    清洁级雄性SD大鼠48只，体质量180～200 g，购自华中科技大学动物实验中心，合格证号：SCXK(鄂)2010-0009，均在适应性喂养2周后行相应实验。

    血糖、血肌酐和血白蛋白试剂盒(南京建成生物工程研究所)、总RNA提取试剂盒(北京博凌科为生物科技有限公司)、琼脂糖(上海仁凯生物科技有限公司)、引物(上海生工生物股份有限公司)，多克隆抗体HIF-1α、单克隆抗体β-actin以及及ECL发光试剂盒(美国 Santa Cruz公司)、单克隆抗体VEGF(Abcam公司)、二抗(金斯瑞生物科技有限公司)。

    TDZ5-WS型低速离心机(湖南湘仪实验室仪器公司)、UV1100型紫外分光光度仪(Techcomp公司)、7900HTPCR仪(ABI公司)、中晶2500型扫描仪(上海中晶科技有限公司)、Mini-Protean Tetra蛋白电泳仪(美国Bio-rad公司)。

    1.2动物分组及造模方法

    大鼠随机分成正常对照组、2型糖尿病肾病模型组(模型组)以及苦瓜总皂苷干预组(治疗组)，每组16只，其中糖尿病肾病组和模型组施行单侧肾切除手术，手术具体操作方法为：(1)1%戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉，固定；(2)切开大腹部找到左肾；(3)将左肾蒂部位结扎并摘除，之后给青霉素注射、缝合；(4)正常组大鼠采用同样方法处理，但肾脏不摘除；(5)手术后每天给予大鼠肌注青霉素1周。

    将大鼠再饲养3周后，糖尿病肾病组以及模型组给予链脲佐菌素60 mg/kg一次性腹腔注射，注射3天后尾静脉取血，血糖仪测定，空腹血糖>16.7 mmol/L时判定造模成功。

    模型建立成功后，正常组和模型组给予生理盐水灌胃，苦瓜总皂苷治疗组给予苦瓜总皂苷灌胃，于实验2、4、6、8周末分别测大鼠血糖水平；实验第4周、8周处死大鼠各半，测24小时尿蛋白定量；肾组织HE染色、RT-PCR以及Western Blot检测肾组织HIF-1α和VEGF表达 ......