周建国 邬兰 马双姣 石林春 金钺 姚辉

    基于ITS2序列的荆芥及其混伪品的DNA条形码鉴定

    周建国 邬兰 马双姣 石林春 金钺 姚辉

    目的 通过分析裂叶荆芥及其混伪品的ITS2条形码序列，探索鉴定荆芥、荆芥穗及其混伪品的新方法，以保证荆芥的质量及临床疗效。方法 对裂叶荆芥样品进行DNA提取、PCR扩增ITS2片段和双向测序，所有序列用软件MEGA 6.0进行相关数据分析，对裂叶荆芥及其混伪品间的种间序列差异进行分析比较，计算其种间、种内K2P遗传距离，并构建邻接树。结果 裂叶荆芥ITS2序列长度为232 bp，G+C含量为66.8%，序列高度保守，种内无变异位点。裂叶荆芥与其混伪品种间变异位点较多，种间K2P最小距离为0.0175，大于其种内距离，NJ树显示可以将裂叶荆芥与其混伪品完全分开。结论 ITS2序列可鉴别荆芥、荆芥穗及其混伪品，为荆芥的种质资源鉴定和保证临床用药安全提供了良好的技术手段。

    荆芥； ITS2序列； 鉴定； DNA条形码； 混伪品

    荆芥为中国传统中药材，《中华人民共和国药典》(一部)记载其来源为唇形科植物荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的干燥地上部分，具有解表散风，透疹，消疮的功效，常用于感冒、头痛、麻疹等症[1]。该物种在《Flora of China》收录为裂叶荆芥Nepeta tenuifolia Benth.。临床应用中，荆芥药材混伪品主要为同属多裂叶荆芥Nepeta multifida L.、荆芥 Nepeta cataria L.、藜科土荆芥 Chenopodium ambrosioides L.。荆芥药材临床多采用栽培品[2]，裂叶荆芥(为区别于混伪品荆芥N.cataria L.，下文荆芥、荆芥穗药材基原物种称为裂叶荆芥)靠种子繁殖。据文献资料记载[3]，裂叶荆芥子的混伪品主要为车前子，已有学者对二者从药材来源、性状、显微、理化等方面进行了研究[4-6]，而在分子鉴定方面仅见邬兰等[7]对裂叶荆芥子和车前子进行了ITS2序列分析。裂叶荆芥的干燥花穗作为荆芥穗入药，其混伪品主要为水荆芥(香薷)Elsholtzia ciliata (Thunb.)Hyland.[8]的干燥花穗。目前，对荆芥药材、荆芥子和荆芥穗及其混伪品的鉴别缺少综合性研究与分析。

    DNA条形码技术是利用基因组中相对较短的、标准的DNA片段对物种进行准确鉴定的新方法，具有简便高效的特点，不受样品性状以及研究者的专业水平限制，适用于中药材的真伪鉴定[9-11]。目前 ......