张小文 崔传宝 张平平 郗红娟 高尔 李聃 刘玉珍 赵军 朱凯 张开蒂

    ·论著·

    苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制研究

    张小文 崔传宝 张平平 郗红娟 高尔 李聃 刘玉珍 赵军 朱凯 张开蒂

    目的探究苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制。方法对人肺癌A549细胞进行培养，培养后分为对照组、低浓度组、中浓度组以及高浓度组，对照组中加入生理盐水，分别向低浓度组、中浓度组以及高浓度组，加入浓度为30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L的苦参碱，作用48小时后采用流式细胞仪及MTT检测法检测A549细胞凋亡情况，计算生长抑制率，并采用Western Blotting和real time PCR检测PI3K、p-AKT蛋白以及PI3K、AKT mRNA表达水平，比较四组之间的差异。结果高浓度组、中浓度组、低浓度组生长抑制率和凋亡率显著高于对照组(P1 材料与方法

    1.1 细胞

    人肺癌A549细胞株，由山东博德生物科技有限公司提供。

    1.2 主要试剂

    苦参碱，分子量为248.36，购自南京广润生物制品有限公司，避光保存，实验中现用现配所需浓度。四甲基偶氮唑蓝(MTT)，购自Sigma公司，用锡箔纸包装，避光保存备用，使用前常温下融化，有效期为一周。RPM1-1640溶液：购自济南美森特生物科技有限公司；二甲基亚砜与荧光染料均购自Sigma公司；以及标记液、孵育缓冲液、PI染液。

    1.3 实验仪器

    二氧化碳孵育箱：型号SANYO MCO-18M；流式细胞仪：型号BD FACSCalibur；微量移液器：型号HG211-WKYⅢ；倒置显微镜：日本奥林巴斯；离心机：德国，型号Eppendorf525L；荧光显微镜：日本奥林巴斯。培养液、培养板由Corning公司提供。

    1.4 实验方法

    细胞培养、传代：将浓度为4×105个/mL的A549细胞接种于96孔培养板中，每组设置6个复孔。每孔滴入180 μL，培养时间为48小时。对照组加入生理盐水，低、中浓度组及高浓度组分别加入浓度为30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L的苦参碱。

    1.5 A549细胞生长抑制率及凋亡率检测方法

    48小时后每孔滴入浓度为5 g/L的MTT液，共20 μL，作用时间为4小时，4小时后将培养基撇弃，加入150 μL DMSO，震荡15分钟，采用酶标仪检测每孔在490 nm的吸光度值 ......