钟郁佳 史业弘 王成

    近年来，随着血管移植技术和低温医学的不断发展，经深低温冻存的血管组织在临床得以应用[1]。目前，临床上常以渗透性冷冻保护剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)保存血管组织。渗透性冷冻保护剂可以进入细胞有效地减轻冻存损伤，但DMSO自身具有一定的细胞毒性，随着其浓度不断增加，它对组织及细胞产生的损伤也逐渐加重[2]。因此，最适冷冻保护剂的选择需要考虑到保护剂的特性和浓度，以此来达到更好的保存效果。目前，冷冻保护剂的发展趋势是找寻安全无毒的冷冻保护成分代替DMSO等渗透性保护剂。糖类作为非渗透性冷冻保护剂的一种，因其无毒性且具有多种生物特性在深低温冻存中的作用已被大量研究证实[3-5]。程晨晨等[6]通过观察不同冷冻保护剂对液氮深低温冻存同种带瓣大动脉的研究结果显示，海藻糖对深低温保存同种带瓣大动脉活性的效果优于使用DMSO，可有效抑制组织细胞凋亡发挥对血管的保护作用。目前，将中药多糖，如红景天多糖、枸杞多糖等作为冷冻保护剂应用于深低温保存的相关研究也逐渐开展[7-8]。

    附子多糖(fuzi-polysaccharides，FPS)是从中药附子中提取的葡聚糖，无明显毒性，且具有抗氧化应激、清除自由基，保护血管平滑肌细胞等作用[9]。但附子多糖能否作为冷冻保护剂发挥对深低温冻存血管的保护作用目前尚未见相关报道。本研究将FPS应用于经深低温冻存的SD大鼠腹主动脉，探讨其能否在深低温环境中通过抑制线粒体凋亡通路发挥对血管的保护作用，并探寻FPS的最适浓度。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级健康雄性SD大鼠36只，8周龄，体质量为(200±20)g，购于长沙市天勤生物技术有限公司(实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2019-0014)。所有大鼠适应性喂养1周，保持12小时的光/暗周期，自由活动进食和饮水。本实验经遵义医科大学实验动物伦理委员会批准，编号：伦审(2021)2021ZH0091。

    1.2 实验试剂与仪器

    附子多糖(批号：U-F-FZTQW20200825)，购自陕西昂盛生物医药科技有限公司。精准称量附子多糖粉剂1 mg、10 mg、100 mg、200 mg，各自溶于10 mL灭菌注射用水中，充分搅拌使其溶解，用滤膜过滤至10 mL离心管中，配制成浓度0.1 mg/mL、1 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL的附子多糖冷冻保护剂，4℃冰箱冷藏保存。

    4%多聚甲醛固定液(批号：E672002-0500)、苏木素伊红染色试剂盒(批号：E607318) ......