胡蓝烁 杨先照 王建云 江海燕 刘果 刘元 张雯 思璎桀 王新月

    溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种发病机制尚未完全明确的慢性非特异性结直肠炎症性疾病。目前认为,肠道微环境改变后产生持续异常的免疫反应可能是导致UC发生和发展的重要原因[1]。肠道菌群失调导致的肠道微环境改变主要表现为肠道菌群种类、数量、比例、定位及生物学特性上的变化,通过干预肠道内的菌群可以对UC起到治疗作用[2]。解毒活血方为笔者团队灌肠治疗UC的临床验方,亦是北中医三院脾胃病科的协定处方,在减轻UC症状、长时间诱导缓解、减少复发方面具有良好的临床疗效[3-4]。以往实验研究表明,解毒活血方灌肠能够下调与肠道微生物识别、免疫反应密切相关的Toll样受体4信号通路相关蛋白的表达,调整促炎因子与抗炎因子水平[5]。在前期研究的基础上,本课题组继续以葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立的UC小鼠模型为研究对象,延长给药及观察时间,观察解毒活血方灌肠对小鼠肠道微生态的物种、丰度、多样性及代谢功能的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    C57BL/6小鼠,SPF级,7周龄,雄性,体质量(21.2±1.5)g,实验动物购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,实验动物合格证号:SCXK(京)2019-0010。本实验经北京永欣康泰科技发展有限公司实验动物中心伦理委员会批准(批准号:YXKT2022L008)。动物在温度(25±2)℃,湿度45%、12小时光照实验环境下自由饮水和进食,适应性喂养1周。

    1.2 实验药物

    本实验使用解毒活血方(黄连10 g、黄柏10 g、苦参10 g、五倍子10 g、三七3 g、白及3 g)购自北京中医药大学第三附属医院药房,由北京康仁堂药业有限公司提供(批号:黄连配方颗粒20039981,黄柏配方颗粒21028681,苦参配方颗粒21021431,五倍子21007911,三七配方颗粒21019521,白及配方颗粒21007453)。药物加蒸馏水充分混匀后,按照60 kg成人和20 g小鼠等效剂量换算比例1∶10,浓缩成含生药6.12 g/mL的灌肠液,灭菌分装后于4℃冰箱保存。美沙拉秦灌肠液(德国Dr.Falk Pharma GmbH公司生产,规格:4 g/支,批号:H20150127)。

    1.3 主要试剂与仪器

    DSS(美国MP Biomedicals公司生产,规格:100 g/瓶,批号:0216011080);OMEGA-soil DNA抽提试剂盒(美国Omega Bio-Tek公司生产,批号:D5265-01);2%琼脂糖凝胶(西班牙Bioweste公司生产,规格:100 g/瓶,批号:111860);FastPfu Polymerase(北京全式金生物技术有限公司生产,批号:M20105);AxyPrep DNA Gel Extraction Kit(美国Axygen公司生产,批号:RH185765);TruSeqTMDNA Sample Prep Kit(美国Illumina公司生产,批号:15055162);NEXTFLEX?Rapid DNA-Seq Kit建库试剂盒(美国Bioo Scientific公司生产,批号:5144-01);MiSeq Reagent Kit v3测序试剂盒(美国Illumina公司生产,批号:15055256) ......