推拿对坐骨神经慢性压迫性损伤模型鼠脊髓背角胶质纤维酸性蛋白和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基表达的影响
可塑性,星形,1材料与方法,1动物及分组,2主要仪器与试剂,3模型制备,4实验方法,5行为学检测,6形态学观察,7免疫荧光染色,8统计学方法,2结果,1各
官乾 刘志凤 于天源 王厚融 张英琦 徐亚静 杨震杰 萨出拉 张润龙 陈金平神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)是由躯体感觉神经系统的损伤或疾病导致的疼痛,是一种临床常见、多发的慢性疼痛[1]。NPP的慢性维持与外周、中枢敏化介导的机械痛、自发性疼痛导致的中枢突触可塑性改变相关。突触可塑性是指神经元突触在受到损伤刺激时,其结构和功能发生相应变化的能力。脊髓背角突触可塑性的改变是参与NPP痛觉传递和维持的重要机制[2]。基础研究证实NPP发生后,会诱导脊髓背角神经元传递机械性痛觉超敏反应,导致中枢敏化,表现为突触可塑性的改变。N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体调节神经元的树突、轴突结构发育及参与突触可塑性的形成。脊髓背角含有NMDA受体2B亚基(NR2B),其变化会改变突触结构和功能的可塑性,从而影响动物行为。因此NR2B是NPP模型大鼠脊髓背角突触可塑性变化的重要调节因子。星形胶质细胞是神经系统中数量最多、分布最广的神经胶质细胞,其活化的标志物是神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。经研究证实,星形胶质细胞的也在NPP中发挥重要作用[3]。
前期研究显示,三法三穴可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,改善坐骨神经损伤大鼠的痛觉敏感程度;三法三穴还能改善大鼠的坐骨神经损伤点、脊髓腹角和腓肠肌等超微结构,促进周围神经损伤导致的感觉和运动功能恢复,提高突触传递效率,抑制痛觉敏化,促进感觉功能和运动功能的恢复[4-5]。本研究建立坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型,通过机械缩足反射阈值和累积疼痛评分评价机械痛敏反应和自发性疼痛的恢复情况,通过透射电镜观察脊髓背角形态变化,通过免疫荧光观察推拿对CCI大鼠脊髓背角GFAP、NR2B表达的影响。探讨推拿镇痛与脊髓背角突触可塑性变化和星形胶质细胞的关系,为临床治疗NPP提供客观的实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
雄性SD大鼠,45只,体质量(200±10)g,购自于斯贝福(北京)生物科技有限公司,饲养在北京中医药大学动物房内,3只/笼,环境温度(25±1)℃,相对湿度(50±5)%,昼夜节律,自由饮食,每周更换两次垫料。适应性饲养1周,经电子测痛仪(BIO-EVF5)检测后筛选出痛阈均一的大鼠36只。所有操作遵循北京中医药大学实验动物伦理委员会相关规定(审批号:BUCM-4-2020111103-4087) ......
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