张浩然 李毓秋 田琪 于晗 王翔宇 徐琬梨

    非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤疾病[1],流行病学显示,NAFLD全球患病率为25%[2],严重威胁人类健康。因其关键致病因素为“痰”和“瘀”,故痰湿证是NAFLD的一种主要证型[3],且在已有的对NAFLD中医证型的临床研究中,痰湿证尤为常见。辨证论治是中医诊断学的基本原则,也是中医临床诊治的特色及核心,对个体的精准辨证与脂质组学的微观探索有异曲同工之妙。机体的生理病理改变往往伴随着代谢过程及成分的变化[4],NAFLD痰湿证的致病机制与代谢物紊乱密切相关[5],而脂质组学作为代谢组学的重要分支之一,为现代疾病的诊断提供了更有利的条件[6]。且中医证型具备多样性,根据脂质代谢在NAFLD病程中的参与作用可推断其代谢标志物可能是区别NAFLD中医证型的微观物质基础及客观化依据。但目前国内有关对NAFLD痰湿证的脂质组学分析相对较少。本研究通过液相色谱—质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术检测正常组大鼠与造模后痰湿组大鼠肝脏脂质代谢物,探讨NAFLD痰湿证大鼠肝脏脂质代谢规律及特点,发现脂质代谢标志物,并探索痰湿证NAFLD证型的脂质代谢机制,有助于对NAFLD痰湿证进行精准辨证,为NAFLD痰湿证的诊断及有效防治提供新的科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与试剂

    仪器:液相色谱仪(Thermo Vanquish)、质谱仪(Thermo QE Focus)、冷冻离心机(湘仪 H1850-R)、混匀仪(其林贝尔 BE-2600)、真空浓缩仪(eppendorf 5305)、滤膜(Jin Teng 0.22 μm PTFE)、组织研磨器(美壁 MB-96)

    试剂:甲醇(色谱纯,Thermo)、乙腈(色谱纯,Thermo)、甲酸(色谱纯,TCI)、甲酸铵(色谱纯,Sigma)、氯仿(色谱纯,沃凯)、异丙醇(色谱纯,Thermo)。

    1.2 实验动物

    SPF级雄性8周龄SD大鼠,16只,购自济南朋悦实验动物繁育有限公司,合格证号:370726210100095071;许可证号:SCXK(鲁)2019 0003。动物实验遵守实验动物伦理学要求。

    1.3 模型制备分组及验证

    大鼠适应性喂养7天后,以随机数字的方法分成两组,每组8只,每笼饲养数量不超过3只,光照12小时/天,饲养温度(24±1)℃,相对湿度45%～70%,自由摄食和摄水 ......