转换生长因子β1及Ⅳ型胶原表达与慢性乙型肝炎预后的关系(1)
[摘要]目的：研究TGF-β1，Co-Ⅳ表达与CHB预后的关系。方法：对131例CHB首、末2次肝活检样本作TGF-β1，Co-Ⅳ免疫组化染色，部分样本进行了TGF-β1mRNA原位杂交测定。结果：TGF-β1，Co-Ⅳ表达变化、分布范围与肝组织炎症、血管增生及纤维化有关(P<0.01)；肝组织炎症坏死修复较快，肝纤维化降解延迟(P<0.01)，肝血管增生显著者易向肝硬变转变，少数则发展为HCC。结论：TGF-β1，Co-Ⅳ参与了CHB肝血管增生、肝纤维化的形成及逆转。
[关键词]慢性乙型肝炎；转换生长因子-β1；Ⅳ-型胶原；原位杂交
Relationship between expression of transforming growth factor beta-1 and Ⅳ-collagen with prognosis in hepatitis B
XU Chang-Jiang，YAN Jia-chun ， MA Yong， LI Rui-Bin，DING Ti-long，YUAN Su-na ，ZHANGWen-xue
, http://www.100md.com
(The center of liver disease， 123rd hosptol of PLA，Bengbu 233015，China)
[Abstract]Objective：To study the relationship between the expression of transforming growth beta-1(TGF-β1) and Ⅳ-collagen (Co-Ⅳ) with prognosis in chronic hepatitis B(CHB). Methods：The first and last specimens of follow-up hepatic tissues biopsies in 131 patients with CHB were observed by immunohistochemical stains(TGF-β1,Co-Ⅳ). A part specimens in CHB were determined by in situ hybridization(TGF-β1 mRNA). Results：There were close related in the expression change of TGF-β1,Co-Ⅳ,distribution range together with the inflammation and blood vessel hyperplasia in CHB(P<0.01).Necrosis and inflammation of liver tissues restore to compare quick and the degradation of hepatic fibrosis were postponed (P<0.01).The striking hepatic vascular proliferation easy to turn cirrhosis of liver and a few conversion in HCC.Conclusion：TGF-β1,Co-Ⅳ to take part in the formation and reversion of hepatic vascular proliferation and hepatic fibrosis in CHB.
, 百拇医药
[Keywords]CHB； TGF-β1；Co-Ⅳ；Follow-up,in situ hybridization
在慢性乙型肝炎(CHB)向肝硬变的发展中，肝纤维化是必经阶段，有多种蛋白质参与其病理转化，但转换生长因子β1( TGF-β1)及Ⅳ型胶原(Co-Ⅳ)在其中的作用，缺乏随访的肝组织学资料。鉴此，本研究对131例CHB随访的肝活检标本，用免疫组织化学、原位杂交技术对TGF-β1，Co-Ⅳ在肝组织中表达与预后的关系进行了观察。
1资料和方法
1.1病例来源
我院1983～2003年共接收CHB 2次以上随访的肝活检样本131例，其中男121例，女10例，年龄15～55岁(平均26.6岁)。其中，2次肝活检者105例，3次18例，4次8例。2次肝活检间隔3～5个月者34例，6～11个月者39例，12～23个月者32例，2～3年者18例，5～10年者8例，平均间隔18.9个月。
, 百拇医药
1.2肝活检方法
用沪产16号肝活检针，1秒钟负压抽吸肝组织，长度≥1.5 cm，10%福尔马林液固定(不少于12 h)，常规石蜡连续切片，作HE、网状、胶原及弹力纤维染色。
1.3分类
参照国内诊断标准[1]将其分为慢性肝炎(G1、G2、G3、G4)、活动性肝硬变(Aci)、静止性肝硬变(Ici)和肝细胞癌(HCC)，并对其肝纤维化进行了分期观察(S0，S1-3，S4-6，S7-10)[2]。
1.4观察方法
对本组肝组织病理学G、S转变作了总结。G，S分值下降为好转，上升为加重，否则为无变化。并对其与肝活检间隔的关系作了比较。肝样本作TGFβ1，Co-Ⅳ免疫组化染色。另选10例正常肝组织作对照(对照组)。TGF-β1， Co-Ⅳ免疫组化染色按说明书进行。光镜观察肝组织病理学变化，重点观察汇管区、纤维带、肝窦及窦周间隙、肝细胞TGFβ1， Co-Ⅳ染色程度、分布情况。判断标准选切片最重病变区观察、定级。免疫组化染色以细胞质膜或纤维带有棕黄色或深棕黄色粗细颗粒为阳性，否则为阴性。阳性(+)，小片少量、散在，低倍镜下清晰可见；强阳性(++)，大量束状分布，着色强烈，阳性区堿宽，互相连接成片。本研究将对照组视为阴性(-)。
, http://www.100md.com
1.5原位杂交
对本组10例对照组及部分首、末2次肝活检样本作 TGF-β1mRNA原位杂交定位观察。mRNA探针及地高辛标记TGF-β1原位杂交检测试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，实验参照《分子生物学常用实验方法》[3]，并稍作改进：①切片脱蜡，水化；②滴加PK酶消化10 min；③4%多聚甲醛固定10 min；④90%乙醇脱水15 s，滴加杂交液，80°C变性10 min，继续孵育16～22 h；⑤马血清室温封闭1 h；⑥抗-Dig-AP37°C孵育1 h；⑦NBT/BCIP显色20～40 min；⑧核固红复染，脱水透明后封片。每批实验均设置无探针杂交对照，无抗-Dig-AP杂交对照，RnaseA消化后杂交对照及阳性对照。阳性对照片由试剂公司提供。
1.6统计学处理
采用χ2显著性检验，P<0.05认为有显著性差异。
, 百拇医药
2结果
2.1随访结果
详见表1～4。本组转变为HCC3例，皆死亡。肝组织病理学G、S的结果及转变情况，见表1。表2资料提示，尽管肝活检间隔与G、S的病理转变不同(P<0.01)，但判断其病变加重或减轻时，肝活检间隔1a左右较为正确。从表3资料可见，TGF-β1，Co-Ⅳ在随访的肝组织表达是有区别的：在G1组，首末2次肝组织TGF-β1，Co-Ⅳ表达无差异性，其表达变化集中在G2～G4组，尤其后者为显著(P<0.001)。而在S1～S3组，其表达则显示差异性(P<0.05～0.01)，尤其S4～S6组最显著(P<0.001)，而S7～S10组则无差异性(P>0.05)。提示TGF-β1， Co-Ⅳ表达变化随肝组织的炎症、肝纤维化的好转或加重而升降，这在3次、4次随访的肝活检标本中被进一步证实(表4)。, 百拇医药(徐长江 严家春 马 勇 李瑞斌 丁体龙 袁苏娜 张文学)
[关键词]慢性乙型肝炎；转换生长因子-β1；Ⅳ-型胶原；原位杂交
Relationship between expression of transforming growth factor beta-1 and Ⅳ-collagen with prognosis in hepatitis B
XU Chang-Jiang，YAN Jia-chun ， MA Yong， LI Rui-Bin，DING Ti-long，YUAN Su-na ，ZHANGWen-xue
, http://www.100md.com
(The center of liver disease， 123rd hosptol of PLA，Bengbu 233015，China)
[Abstract]Objective：To study the relationship between the expression of transforming growth beta-1(TGF-β1) and Ⅳ-collagen (Co-Ⅳ) with prognosis in chronic hepatitis B(CHB). Methods：The first and last specimens of follow-up hepatic tissues biopsies in 131 patients with CHB were observed by immunohistochemical stains(TGF-β1,Co-Ⅳ). A part specimens in CHB were determined by in situ hybridization(TGF-β1 mRNA). Results：There were close related in the expression change of TGF-β1,Co-Ⅳ,distribution range together with the inflammation and blood vessel hyperplasia in CHB(P<0.01).Necrosis and inflammation of liver tissues restore to compare quick and the degradation of hepatic fibrosis were postponed (P<0.01).The striking hepatic vascular proliferation easy to turn cirrhosis of liver and a few conversion in HCC.Conclusion：TGF-β1,Co-Ⅳ to take part in the formation and reversion of hepatic vascular proliferation and hepatic fibrosis in CHB.
, 百拇医药
[Keywords]CHB； TGF-β1；Co-Ⅳ；Follow-up,in situ hybridization
在慢性乙型肝炎(CHB)向肝硬变的发展中，肝纤维化是必经阶段，有多种蛋白质参与其病理转化，但转换生长因子β1( TGF-β1)及Ⅳ型胶原(Co-Ⅳ)在其中的作用，缺乏随访的肝组织学资料。鉴此，本研究对131例CHB随访的肝活检标本，用免疫组织化学、原位杂交技术对TGF-β1，Co-Ⅳ在肝组织中表达与预后的关系进行了观察。
1资料和方法
1.1病例来源
我院1983～2003年共接收CHB 2次以上随访的肝活检样本131例，其中男121例，女10例，年龄15～55岁(平均26.6岁)。其中，2次肝活检者105例，3次18例，4次8例。2次肝活检间隔3～5个月者34例，6～11个月者39例，12～23个月者32例，2～3年者18例，5～10年者8例，平均间隔18.9个月。
, 百拇医药
1.2肝活检方法
用沪产16号肝活检针，1秒钟负压抽吸肝组织，长度≥1.5 cm，10%福尔马林液固定(不少于12 h)，常规石蜡连续切片，作HE、网状、胶原及弹力纤维染色。
1.3分类
参照国内诊断标准[1]将其分为慢性肝炎(G1、G2、G3、G4)、活动性肝硬变(Aci)、静止性肝硬变(Ici)和肝细胞癌(HCC)，并对其肝纤维化进行了分期观察(S0，S1-3，S4-6，S7-10)[2]。
1.4观察方法
对本组肝组织病理学G、S转变作了总结。G，S分值下降为好转，上升为加重，否则为无变化。并对其与肝活检间隔的关系作了比较。肝样本作TGFβ1，Co-Ⅳ免疫组化染色。另选10例正常肝组织作对照(对照组)。TGF-β1， Co-Ⅳ免疫组化染色按说明书进行。光镜观察肝组织病理学变化，重点观察汇管区、纤维带、肝窦及窦周间隙、肝细胞TGFβ1， Co-Ⅳ染色程度、分布情况。判断标准选切片最重病变区观察、定级。免疫组化染色以细胞质膜或纤维带有棕黄色或深棕黄色粗细颗粒为阳性，否则为阴性。阳性(+)，小片少量、散在，低倍镜下清晰可见；强阳性(++)，大量束状分布，着色强烈，阳性区堿宽，互相连接成片。本研究将对照组视为阴性(-)。
, http://www.100md.com
1.5原位杂交
对本组10例对照组及部分首、末2次肝活检样本作 TGF-β1mRNA原位杂交定位观察。mRNA探针及地高辛标记TGF-β1原位杂交检测试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，实验参照《分子生物学常用实验方法》[3]，并稍作改进：①切片脱蜡，水化；②滴加PK酶消化10 min；③4%多聚甲醛固定10 min；④90%乙醇脱水15 s，滴加杂交液，80°C变性10 min，继续孵育16～22 h；⑤马血清室温封闭1 h；⑥抗-Dig-AP37°C孵育1 h；⑦NBT/BCIP显色20～40 min；⑧核固红复染，脱水透明后封片。每批实验均设置无探针杂交对照，无抗-Dig-AP杂交对照，RnaseA消化后杂交对照及阳性对照。阳性对照片由试剂公司提供。
1.6统计学处理
采用χ2显著性检验，P<0.05认为有显著性差异。
, 百拇医药
2结果
2.1随访结果
详见表1～4。本组转变为HCC3例，皆死亡。肝组织病理学G、S的结果及转变情况，见表1。表2资料提示，尽管肝活检间隔与G、S的病理转变不同(P<0.01)，但判断其病变加重或减轻时，肝活检间隔1a左右较为正确。从表3资料可见，TGF-β1，Co-Ⅳ在随访的肝组织表达是有区别的：在G1组，首末2次肝组织TGF-β1，Co-Ⅳ表达无差异性，其表达变化集中在G2～G4组，尤其后者为显著(P<0.001)。而在S1～S3组，其表达则显示差异性(P<0.05～0.01)，尤其S4～S6组最显著(P<0.001)，而S7～S10组则无差异性(P>0.05)。提示TGF-β1， Co-Ⅳ表达变化随肝组织的炎症、肝纤维化的好转或加重而升降，这在3次、4次随访的肝活检标本中被进一步证实(表4)。, 百拇医药(徐长江 严家春 马 勇 李瑞斌 丁体龙 袁苏娜 张文学)