HPLC测定复方鸡骨草胶囊中栀子苷含量
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【摘要】 目的：建立复方鸡骨草胶囊(鸡骨草、栀子、枸杞子、白芍)中栀子苷含量测定方法。方法：采用HPLC，以CLC-ODS柱为固定相，甲醇-0.1%磷酸溶液(22∶78)为流动相，检测波长为240nm。结果：栀子苷在(0.0248～0.1488)mg·mL-1(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率栀子苷99.52%、RSD=1.18%(n=6)。结论：含量测定方法简便准确，重复性好，可用于控制复方鸡骨草胶囊的质量。
【关键词】 复方鸡骨草胶囊；栀子苷；HPLC
Dtermination of geniposide in Fufang Jigucao capsule by HPLC
ZHOU Hai*，XIE Xue-shen，CHEN Zhang-yuan
(Guangxi Yulin Pharmaceutical Co., Ltd, Yulin 537001,China)
, 百拇医药
【Abstract】 Objective： To develop an HPLC method for the determination of geniposide in Fufang Jigucao capsule (Herba Abri, Fructus Gardeniac, Fructus, Radix Paeoniae Alba). Methods：Samples were separated on a CLC-ODS colum with the mobile phase of methanol-0.1%H3PO4(22∶78)and the detection wavelength was set at 240nm. Results：The calibration curve was linear in the range of(0.0248-0.1488)mg·mL-1(r=0.9999)for geniposide.The average recoveries were 99.52%、RSD=1.18%(n=6). Conclusion：The method is accurate and repentable, and can beused for the quality control of Fufang Jigucao capsule.
, 百拇医药
【Key words】Fufang Jigucao capsule；geniposide；HPLC
复方鸡骨草胶囊由鸡骨草、栀子、枸杞子、白芍等中药材制成，具有清肝利胆，清热解毒的功效；用于肝胆湿热引起的胁肋不舒、胃脘胀痛、疲倦乏力、口苦、小便黄赤。而栀子作为其中的主药之一，选择栀子中的主要活性成分栀子苷[1]作为定量的指标，可以较好地控制该产品的质量。
1仪器、试药与样品
高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AD泵，SPD-10AV紫外检测器，C-R7Ae数据处理机；超声波提取器CQF-1-6(中船七院七二六所)。甲醇为色谱纯、磷酸为分析纯；水为去离子水。栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：110749-200512)；复方鸡骨草胶囊由广西玉林制药有限责任公司生产。
2方法与结果
, 百拇医药
2.1色谱条件
色谱柱为Shim-pak CLC-ODS(φ6.0 mm×150 mm，10 µm，日本岛津)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(22:78)，流速：1.0 ml·min-1，柱温：30℃，检测波长：240 nm，进样量10 µl。
2.2对照品溶液制备
取栀子苷适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含60 µg的溶液，即得。
2.3供试品溶液制备取20粒复方鸡骨草胶囊的内容物，研细、混匀，取约0.5g，精密称定，加甲醇30ml，超声处理(功率300W，频率50kHz )20分钟，取出，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
, 百拇医药 2.4干扰试验按处方制备不含栀子药材的样品，照“2.3”方法制备阴性样品溶液，取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明阴性样品溶液对测定无干扰。结果见图1。
2.5标准溶液制备与线性考察精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.248mg的溶液作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0 、4.0、5.0、6.0 ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各精密吸取10µl，在上述色谱条件下，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，栀子苷浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程：Y(峰面积)=365768X(µg)+3998，R=0.9999(n=6)，实验表明：栀子苷在(0.0248～0.1488)mg·ml-1范围内呈良好的线性关系。
2.6精密度试验取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，精密吸取10µl，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定每次进样的峰面积，结果峰面积的RSD为1.00%(n=5)。
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2.7稳定性试验吸取供试品溶液10µl，在上述色谱条件下，于0、1、4、8、12、24小时，分别注入液相色谱仪，测定栀子苷峰面积，结果栀子苷峰面积RSD=1.34%，说明栀子苷在24小时内稳定。
2.8重复性试验取同一批号的复方鸡骨草胶囊样品5份，按供试品溶液制备项下操作，制备5份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl注入液相色谱仪，测得栀子苷的平均含量为5.0812(mg· g-1)，RSD为1.02%(n=5)。
2.9回收率试验精密称取已知栀子苷含量(5.6624 mg·g-1)的复方鸡骨草胶囊样品6份，分别准确加入栀子苷对照品溶液(2.80 mg·ml-1)各1ml，按供试品溶液制备项下操作，制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别吸取10µL注入液相色谱仪，结果见表1。
2.10样品测定
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精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录峰面积，根据对照品栀子苷的峰面积，计算出样品溶液中栀子苷的含量(见表2)。
3讨论
3.1复方鸡骨草胶囊由10多味中药组成。采用《中国药典》2005年版[2]测定栀子苷的条件无法达到主峰与杂质峰的基线分离，也曾经采用中性氧化铝和大孔树脂对供试品溶液进行过柱处理，但分离效果均不佳。
3.2曾据资料选择流动相：曾试验过如：乙腈-0.1%磷酸水溶液(12:88)[3]、水-乙腈(85:15)[4]、乙腈-水(13:87)[5]等流动相，结果分离效果不佳，并且由于酸度较低，流动相容易长霉，造成柱压升高，影响到准确测定栀子苷的含量，结果以本实验收载的流动相甲醇-0.1%磷酸溶液(22:78)为最佳。
[参考文献]
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[1]王喜军.高效液相色谱在中药研究中的应用[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，199.98.
[2]中国药典[S]. 一部.2005：173.
[3]李长根.刘春亮.HPLC法测定孕妇金花中栀子苷的含量[J].安徽医药，2007，11(11)：1010.
[4]商伟.白旭东.高效液相色谱法测定新雪颗粒中栀子苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2005，12(8)：36.
[5] 刘天柱,莫结丽.HPLC法测定龙胆泻肝片中栀子苷的含量[J].中国医药导报，2008，5(10)：34.
(收稿日期：2008-11-04), 百拇医药(周 海 谢学深 陈章源)