高效液相色谱法测定盐酸溴己新注射液的含量
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2010年3月15日
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[摘要] 目的:建立高效液相色谱法测定盐酸溴己新注射液的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为水-甲醇-三乙胺(含5 mmol庚烷磺酸钠,用磷酸调pH至3.5)(30∶70∶0.3),检测波长249 nm,流速为1.0 ml/min。结果:盐酸溴己新浓度在4.0～80.0 μg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系,高、中、低3种浓度的平均加样回收率为99.1%(RSD=0.33%,n=6)。结论:高效液相色谱法方法简便,结果可靠,专属性强,可用于盐酸溴己新注射液的质量控制。
[关键词] 高效液相色谱法;盐酸溴己新;含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)03(b)-112-01
盐酸溴己新注射液的现行质量标准用紫外分光光度法测定含量,专属性不强,易受辅料干扰[1-3]。笔者改用高效液相色谱法测定含量,研究结果报道如下:
1 仪器与试药
SP 8810高效液相色谱仪,包括SP 100紫外检测器,N 2010色谱工作站;盐酸溴己新对照品(批号:100427-200301,中国药品生物制品检定所);盐酸溴己新注射液(泗水希尔康制药有限公司,批号:090107,090201,081208);甲醇,色谱纯;磷酸、三乙胺、庚烷磺酸钠,分析纯;水,重蒸馏水。
2 实验方法学考察
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18(4.6 mm×200 mm, 5 μm);流动相:水-甲醇-三乙胺(含5 mmol庚烷磺酸钠,用磷酸调pH至3.5)(30∶70∶0.3);流速:1.0 ml/min;柱温:室温;检测波长:249 nm;进样体积为20 μl;理论塔板数以盐酸溴己新计不低于5 000。
2.2溶液制备[4-5]
精密称取对照品20.00 mg,置100 ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液;精密量取储备溶液5 ml,置50 ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液;精密量取供试品溶液适量,用流动相稀释成每毫升含盐酸溴己新20 μg的溶液,作为供试品溶液。
2.3 专属性试验
取供试品溶液4份,经酸、碱、光照及强热破坏,将其破坏产物照供试品溶液制备,依法进样。结果:在该法色谱条件下盐酸溴己新与各降解产物能很好地分离。
2.4线性关系考察
精密量取对照品储备液1、2、5、10、15、20 ml,置50 ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,进样20 μl,测定峰面积。以峰面积(A)对其浓度(C)作线性回归,回归方程为Y=394.85+5 223.31X,r=0.999 9(n=6)。结果:盐酸溴己新检测浓度的线性范围为4.0～80.0 μg/ml。
2.5精密度试验
取对照品溶液,连续重复进样6次,测得的平均峰面积为104 761,RSD=0.45%(n=6)。表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验
取同一批供试品溶液,在室温条件下放置,分别在0、4、8、12、24 h测定,平均峰面积为104 978,RSD值为0.40%(n=5)。表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.7重现性试验
取同一批号样品6份,依法测定含量。结果:平均含量为99.4%,RSD值为0.38%(n=6),表明方法重现性良好。
2.8加样回收率测定
精密量取已知含量的盐酸溴己新注射液(含量99.7%)适量(相当于盐酸溴己新10 mg)6份,分为3组,每组分别精密加入对照品适量,配成低、中、高3个质量浓度,按供试品溶液制备,测定回收率。结果见表1。
2.9样品测定
取对照品溶液、供试品溶液各20 μl,进样测定,按外标法计算含量。结果:3批供试品含量分别为99.4%、99.1%、98.6%。
3讨论
紫外扫描发现,以流动相为溶剂,盐酸溴己新的紫外光谱在249 nm波长处有最大吸收峰,故在此波长处测定含量[6]。
经破坏试验验证,在高效液相色谱法色谱条件下主峰与降解产物能达到良好的分离,能够排除降解产物的干扰,专属性较强,可用于盐酸溴己新注射液的质量控制[7] ......
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