核因子-кB的表达对TNF-α 和IL-8的影响以及对溃疡愈合的作用(2)
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1.2.4 胃黏膜内NF-кB积分光密度的测定采用免疫组化Elivison二步法检测(NF-кB一抗1∶50稀释,山羊抗兔酶标二抗,1∶150稀释)。
1.2.5 血清TNF-α含量测定用ELISA方法按试剂盒说明书测定血清中的TNF-α的含量,结果表示为pg/ml。
1.2.6 血清IL-8含量的测定用ELISA方法按试剂盒说明书测定血清中的IL-8的含量,结果表示为pg/ml。
1.2.7 黏膜下组织中炎性细胞数量的测定在光学显微镜下放大400倍,计数H-E染色切片黏膜下组织中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞的数量。结果表示为个/HP。
1.3 统计学分析
所得数据为计量数据,用均数±标准差表示,用SPSS 16.0统计分析软件进行统计学分析。组间差异比较采用单因素方差分析中的LSD方法。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 镜下溃疡愈合过程中溃疡组织学变化
见图1。
由图1可见,A:正常胃黏膜;B:3 d组,模型复制后第3天镜下出现典型的溃疡,溃疡边缘黏膜扩张,呈火山口状。C:8 d组,模型复制后第8天镜下溃疡边缘再生黏膜腺体扩张,并向新生的肉芽组织移行;D:25 d组,模型复制后第25天镜下溃疡完全愈合,可见原溃疡部位再生黏膜腺体扩张,结构紊乱。B与C中箭头指向溃疡部位,D中箭头指向溃疡愈合部位。H-E染色,放大100倍。
2.2 溃疡愈合过程中大鼠胃黏膜内Gas含量的变化
见图2、3。
2.3 溃疡愈合过程中胃液量和pH的变化
见图4、5。
2.4 溃疡愈合过程中胃黏膜内NF-кB含量变化
见图6、7。
2.5 溃疡愈合过程中血清TNF-α含量的变化
见图8。
2.6 溃疡愈合过程中血清IL-8含量的变化
见图9。
2.7 溃疡愈合过程中黏膜下组织炎性细胞数的变化
见图10。
3讨论
乙酸溃疡模型复制后第3天出现了典型的溃疡,而后溃疡在2～3周内完全愈合[7]。本实验在模型复制的第3天,溃疡面积约为27 mm2,镜下溃疡边缘黏膜扩张,呈火山口状(图1B),第8天溃疡面积约为8 mm2,镜下溃疡边缘再生黏膜腺体扩张,并向新生的肉芽组织移行(图1C),至25 d溃疡完全愈合,镜下可见原溃疡部位再生黏膜腺体扩张,结构紊乱(图1D),愈合后的黏膜与正常胃黏膜(图1D)最大的差异是腺体扩张。
胃酸是引起溃疡的重要攻击因子, G细胞分泌Gas可促进壁细胞分泌胃酸[8]。从图2、3来看,3 d组的Gas积分光密度高于8 d组(P<0.01),8 d组的Gas积分光密度高于25 d组(P<0.05);从图4、5来看,3 d组的胃液量高于8 d组(P<0.01),8 d组高于25 d组(P<0.05);3 d组的胃液pH低于8 d组(P<0.01),8 d组的胃液pH低于25 d组(P<0.05)。这些结果表明随着溃疡的愈合,胃黏膜G细胞分泌Gas逐渐减少,使壁细胞分泌胃酸也逐渐减少,对黏膜的损伤也减弱,因此炎症反应减弱。
NF-κB是重要的核转录因子之一[9]。正常情况下NF-κB多为p65和p50两个亚单位组成的异源二聚体,在未受刺激的细胞中,它与κB抑制蛋白(IκB)结合以非活性状态存在于细胞质中。在某些细胞因子的作用下,NF-кB从IкB中释放出来,转移到核内和特定基因的启动子或增强子结合,导致某些基因表达[10]。从图6、7来看,3 d组大鼠胃黏膜内NF-кB积分光密度高于8 d组(P<0.01),8 d组的NF-кB积分光密度高于25 d组(P<0.01),此结果表明,随着NF-кB表达的减少,溃疡逐渐愈合。
TNF-α和IL-8具有介导炎性反应的作用[11]。从图8、9来看,3 d组大鼠血清TNF-α和IL-8含量高于8 d组(P<0.01),8 d组的TNF-α和IL-8含量高于25 d组(P<0.01或P<0.05);从图10来看,3 d组的胃黏膜炎性细胞数量高于8 d组(P<0.01),8 d组的炎性细胞数量高于25 d组(P<0.05)。这些结果表明,随着TNF-α和IL-8的减少,炎性细胞也减少,溃疡逐渐愈合。
NF-кB也是参与炎性反应的一个重要转录因子[12],它的减少可能导致了炎性因子TNF-α和IL-8也逐渐减少,进而使胃黏膜下层炎性细胞数量逐渐减少,炎症逐渐减弱,溃疡逐渐愈合。
由此可以推断:随着胃黏膜G细胞分泌Gas逐渐减少,壁细胞分泌H+也减少,导致炎性反应减弱,然后通过某种机制使NF-кB表达也逐渐减少,进一步使TNF-α和IL-8等炎性因子逐渐减少,使炎性细胞逐渐减少,溃疡逐渐愈合。
[参考文献]
[1]Hayashi Y, Tsuji S, Tsujii M,et al. Topical transplantation of mesenchymal stem cells accelerates gastric ulcer healing in rats[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2008,294(3):G778-G786.
[2]Watanabe T, Higuchi K, Tanigawa T, et al. Mechanisms of peptic ulcer recurrence:role of inflammation[J].Inflammopharmacology,2002,10(12): 291-302.
[3]Jia YT, Wei W, Ma B, et al. Activation of p38 MAPK by reactive oxygen species is essential in a rat model of stress-induced gastric mucosal injury[J]. J Immunol,2007,179(11):7808-7819 ......
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